人白细胞介素18(hIL-18)的纯化及生物学活性的鉴定
目的:在大肠杆菌中高效表达重组人IL-18(rhIL-18)蛋白,制备具有高纯度、高活性的rhIL-18.方法:用IPTG诱导重组蛋白表达载体pKK223-3/hIL-18进行蛋白表达;菌体经超声破碎分离包含体,并对包含体进行洗涤、变性和复性处理,用DEAE-Sepharose CL-6B阴离子交换柱纯化复性的rhIL-18;以人外周血单核淋巴细胞,通过T细胞增殖实验、125I-UdR标记的细胞毒实验、ELISA方法检测细胞因子的产生量等方法,测定rhIL-18的生物学活性.结果:在大肠杆菌中成功地诱导、表达了rhIL-18,SDS-PAGE凝胶电泳分离显示在分子量大约18.3 kD处有一诱导蛋白带,Western blot证明表达产物与抗IL-18单克隆抗体有特异性免疫反应;表达产物经纯化后纯度达94%;表达的rhIL-18蛋白具有促进T细胞增殖、增强NK细胞细胞毒作用及诱导外周血单核淋巴细胞合成IFN-γ的能力,基本上具有天然IL-18相同的生物学活性.结论:为rhIL-18的获得及为进一步研究其生物学功能提供了一定的条件,并为将rhIL-18用于肿瘤的免疫生物治疗奠定了基础.
重组人白细胞介素18、凝胶过滤、T细胞、NK细胞、细胞因子
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R392.1;R73-35
卫生部临床学科重点项目20013145;吉林省科技厅科研项目20020403;吉林省长春市科技局科研项目04-02GG218;吉林大学校科研和教改项目
2005-01-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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