hCGβ与鼠补体片段C3d的连接及其在真核细胞中的表达
目的:构建含新型分子佐剂C3d的hCGβ真核细胞表达质粒,以提高hCGβ的免疫原性.方法:用PCR方法在hCGβcDNA3'端引入BamHI位点,然后利用酶切位点的互补性,与C3d3cDNA连接,构建了pBS-hCGβ-C3d3质粒,最后插入真核细胞表达质粒pcDNA3的CMV启动子下游,以产生pcDNA3-hCGβ-C3d3.将此融合质粒转染瞬时表达系统COS-7细胞表达相应产物.其无血清培养上清液用免疫亲和层析法纯化重组蛋白.Raji细胞免疫细胞化学技术鉴定表达产物准确性.结果:真核细胞瞬时表达系统COS-7细胞经转染了pcDNA3-hCGβ-C3d3质粒后,可分泌hCGβ重组蛋白.1.0×105个COS-7细胞转染了pcDNA3-hCGβ-C3d3质粒,经72 h培养后,可产生152ng的hCGβ重组蛋白,且表达量随时间延长而增高.在有血清培养基中的分泌量明显高于无血清培养基.同时,用Raji细胞免疫细胞化学分析表达产物显示,纯化的表达产物既有C3d结合受体活性,亦有hCGβ抗原性.结论:利用新型分子佐剂C3d与hCGβ的连接,构建了pcDNA3-hCGβ-C3d3真核细胞表达质粒,为提高hCGDNA免疫避孕疫苗的免疫原性及抗生育作用奠定了基础.
hCGβ C3d3 COS-7
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R392.3
上海市自然科学基金00ZB14058;高等学校博士学科点专项科研项目9941;卫生部优秀青年人才科研项目97031
2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
445-450
