10.12140/j.issn.1000-7423.2023.01.004
细粒棘球蚴抗原B对小鼠巨噬细胞RAW264.7的极化作用
目的 探讨细粒棘球蚴抗原B(AgB)对巨噬细胞极化的调控作用.方法 将RAW264.7巨噬细胞培养24h后,分为M1、M2、AgB、AgB+M1、AgB+M2和空白对照组(M0组),每组3孔.待所有巨噬细胞贴壁3 h后,AgB、AgB+M1、AgB+M2组均加入羊源细粒棘球蚴囊液提取的天然AgB(终浓度为1 000 ng/ml),刺激1h后,M1组和AgB+M1组加入脂多糖(LPS,终浓度为100 ng/ml)和γ干扰素(IFN-γ,终浓度为20ng/ml)刺激分化20h;M2组和AgB+M2组加入白细胞介素4(IL-4)、IL-13(终浓度均为20 ng/ml)刺激分化20h;空白对照组不更换培养液,同步培养20h.显微镜下观察巨噬细胞形态.提取各组巨噬细胞总RNA,RT-PCR检测刺激后巨噬细胞表面标志物精氨酸酶1(Arg-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA相对转录水平;蛋白质免疫印迹(Western blotting)分析巨噬细胞蛋白Arg-1、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的相对表达量;ELISA检测刺激后巨噬细胞培养上清中IL-10、TNF-α的表达变化.结果 经刺激分化后,镜下可见M1组和AgB+M1组巨噬细胞大部分呈不规则形,有触角;M2组和AgB+M2组巨噬细胞大部分呈圆形或椭圆形,极少呈不规则形;M0组和AgB组巨噬细胞部分呈圆形、椭圆形,部分呈不规则形.RT-PCR结果显示,M2组和AgB+M2组巨噬细胞的Arg-1 mRNA相对转录水平分别为189.49±68.43、435.83±123.57(t=246.30,P＜0.01),二者均高于 M0 组(1.00±0.00)、M1 组(1.87±1.29)、AgB 组(2.37±2.06)、AgB+M1 组(3.96±1.92)(t=188.50、187.60、187.10、185.50,均 P＜0.01;t=434.80、434.00、433.50、431.90,均P＜0.01);M1和AgB+M1组巨噬细胞的TNF-α mRNA相对转录水平分别为8.34±2.92、8.10±1.54(t=0.24,P＞0.05),二者均高于 M0 组(1.00±0.00)、M2 组(1.37±0.64)、AgB 组(2.86±0.44)、AgB+M2 组(1.62±0.27)(t=7.34、6.97、5.48、6.71,均 P＜0.01;t=7.10、6.74、5.24、6.48,均P＜0.01).Western blotting检测结果显示,M2组巨噬细胞的Arg-1蛋白相对表达量为1.18±0.35,高于 M1 组(0.33±0.18)、AgB+M1 组(0.58±0.10)(t=0.67、0.61,均 P＜0.01),与 AgB 组(1.05±0.17)、AgB+M2 组(0.97±0.27)比较差异无统计学意义(t=0.20、0.13,均 P＞0.05);AgB+M2 与 M1 组、AgB+M1组比较差异均有统计学意义(t=0.52、0.48,均P＜0.05).M1组和AgB+M1组iN0S蛋白相对表达量分别为 0.95±0.21、0.88±0.02(t=0.07,P＞0.05),二者均高于 M0 组(0.03±0.00)、M2 组(0)、AgB组(0)和 AgB+M2 组(0)(t=0.92、0.95、0.95、0.95,均 P＜0.01;t=0.85、0.88、0.88、0.88,均 P＜0.01).ELISA检测结果显示,巨噬细胞培养上清液中,AgB+M1组和AgB+M2组IL-10细胞因子表达量分别为 166.67±56.67、213.33±16.67,均高于 M0 组(0.00±0.00)、M1 组(43.33±36.67)、M2 组(50.00±43.00)、AgB 组(47.50±25.00)(t=166.70、123.30、116.70、119.20,均 P＜0.05;t=213.30、170.00、163.30、165.80,均 P＜0.01).M1、AgB+M1 组 TNF-α 细胞因子表达量分别为 833.13±3.09、745.63±118.00(t=87.50,P＞0.05),均高于 M0 组(217.50±32.26)、M2 组(224.69±17.68)、AgB 组(308.44±4.42)、AgB+M2 组(251.25±1.33)(t=615.60、608.40、524.70、581.90,均 P＜0.01;t=528.10、520.90、437.20、494.40,均P＜0.01).结论 AgB可上调巨噬细胞Arg-1的表达,使其向M2型方向极化,可能是宿主和寄生虫免疫的重要调控分子,参与巨噬细胞的免疫调节.
细粒棘球绦虫、分泌抗原、抗原B、巨噬细胞极化
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R383.33(医学寄生虫学)
国家自然科学基金;国家自然科学基金;省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室立项项目;新疆维吾尔自治区科技厅天山创新团队项目
2023-04-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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