10.12140/j.issn.1000-7423.2022.03.004
骨桥蛋白表达水平对多房棘球蚴原头节生长发育的影响
目的 探讨骨桥蛋白(OPN)表达水平对多房棘球蚴原头节生长发育的影响.方法 从感染多房棘球蚴的长爪沙鼠体内分离原头节,体外培养3d后,分为沉默EmOPN(LV-EmOPN-734)组、沉默对照(LV3-NC)组、过表达EmOPN(LV-EmOPN-0423)组、过表达对照(LV5-NC)组等4组,每组设置3个平行孔,每孔含原头节约5 000个.LV-EmOPN-734组中加入LV-EmOPN-734慢病毒稀释液(终浓度为1.4×107 TU/ml)、LV-EmOPN-0423组中加入LV-EmOPN-0423慢病毒稀释液(终浓度为4.83×108拷贝/ml),相应对照组加入等量的慢病毒稀释液(空质粒).感染后72h,荧光显微镜下观察各组原头节的荧光强度,蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测原头节中OPN的相对表达量,半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)检测试剂盒检测原头节Caspase-3活性,EdU细胞成像试剂盒检测原头节增殖能力.感染后72h,将原头节与大鼠肝癌细胞共培养8～12周,扫描电镜下观察多房棘球蚴囊泡生发层的显微结构.采用t 检验对组间差异进行统计学分析.结果 慢病毒感染原头节后72 h,荧光显微镜下可见慢病毒侵入原头节内,呈环状或点状分布.Western blotting结果显示,LV-EmOPN-734 组 EmOPN 相对表达量为 0.43±0.04,低于 LV3-NC 组的 0.80±0.07(t=8.623,P＜0.01);LV-EmOPN-0423 组 EmOPN 相对表达量为 1.18±0.21,高于 LV5-NC 组的 0.73±0.06(t=3.333,P＜0.05).Caspase-3 活性检测结果显示,LV-EmOPN-734 组 Caspase-3 活性为(61.55±1.64)μmol/L,高于 LV3-NC 组的(28.20±2.16)μmol/L(t=24.57,P＜0.01);LV-EmOPN-0423 组 Caspase-3 活性为(50.11±6.45)μmol/L,低于 LV5-NC组的(78.22±16.43)μmol/L(t=3.185,P＜0.05).EdU 细胞成像试剂盒检测结果显示,LV-EmOPN-734 组EdU+原头节数/总原头节数为 0.47±0.06,低于 LV3-NC 组的 0.72±0.10(t=3.663,P＜0.05);LV-EmOPN-0423组EdU+原头节数/总原头节数为0.81±0.09,高于LV5-NC组的0.54±0.06(t=4.309,P＜0.05).扫描电镜观察结果显示,LV-EmOPN-734组囊泡生发层细胞出现塌陷、皱缩、脱落,失去正常结构;LV-EmOPN-0423组囊泡生发层细胞膜完整,形态饱满,形成生发小囊并长出小蒂与生发层相接.结论 OPN表达水平的升高/降低可促进/抑制多房棘球蚴原头节的生长发育.
多房棘球绦虫、骨桥蛋白、原头节、生长发育
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R383.33(医学寄生虫学)
国家自然科学基金8176120052
2022-08-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
299-305
