10.12140/j.issn.1000-7423.2020.06.006
传播阻断疫苗候选抗原Pb280在伯氏疟原虫中的表达及功能研究
目的 探讨传播阻断疫苗候选抗原Pb280(PBANKA_041710)在伯氏疟原虫中的表达情况及基因功能.方法 从NCBI数据库获取不同疟原虫种属Pb280氨基酸同源序列,用MEGA7构建系统进化树.用SMART在线网站预测Pb280蛋白结构域.昆明小鼠经尾静脉注射1×106个Pb感染红细胞(iRBC),当小鼠原虫血症达3％～5％时取眼球血进行体外培养并分离裂殖体.将带血凝素(HA)的Pb280标签质粒(Pb280HA)和Pb280敲除质粒(Pb280KO)线性化后分别转染裂殖体,用转染后裂殖体注射感染小鼠(1×107个裂殖体/鼠),PCR鉴定感染小鼠中的转基因疟原虫,对转基因疟原虫进行单克隆筛选,获得1株Pb280HA标签虫株和2株Pb280KO虫株(分别命名为Pb280HA型、Pb280KO-C1型、Pb280KO-C2型虫株).蛋白质免疫印迹分析(Western blotting)和间接免疫荧光试验(IFA)分析Pb280在伯氏疟原虫中的表达情况.取9只雌性昆明小鼠随机分为基因敲除Cl组(C1组)、基因敲除C2组(C2组)和对照组,每组3只,每鼠分别经尾静脉注射5×106个Pb280KO-C1型、Pb280KO-C2型和野生型(WT)伯氏疟原虫.感染后第3～10天,每天取小鼠尾静脉血进行血涂片检测,计算原虫血症;计算感染后第3天雌雄配子体比及配子体率.感染后第3天取小鼠尾静脉血与动合子培养基混合培养15 min后计数雄配子体出丝中心数、雌雄配子结合数、雌配子数,继续培养24 h后计数动合子数.原虫血症、配子体率和雌雄配子体比的比较采用x2检验,其余各组数据之间的比较采用单因素方差分析.结果 系统进化树显示,Pb280与约氏疟原虫PY04819的亲缘关系最近.SMART预测结果显示,Pb280含有一个N端信号肽、10个跨膜区和1个生长因子受体结构域.Western blotting分析显示,Pb280蛋白在伯氏疟原虫中有表达,相对分子质量(Mr)约280 000.IFA检测结果显示,在配子体到动合子的发育过程中,Pb280从胞浆向质膜表面分泌.基因功能分析结果显示,感染后第3天,3组小鼠原虫血症均约为15％,感染后第10天均达60％以上,C1组、C2组与对照组的差异无统计学意义(P＞0.05).感染后第3天,C1组配子体率、雌雄配子体比、平均每10个视野配子体出丝中心数量、雌雄配子结合数和雌配子数分别为39.50％.、1.65、(21.63 ±4.03)个、(12.50 ±8.02)个和(930.00 ±79.20)个,C2组分别为34.50％.、1.71、(18.25 ±5.85)个、(13.75 ±9.54)个和(885.00 ±130.11)个,对照组分别为41.50％.、1.74、(21.44 ±4.73)个、(15.31 ±8.06)个和(1 018.50 ±58.69)个,3组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).C1组动合子形成数量为(410.00 ± 67.88)个,C2组为(557.50 ±2.12)个,对照组为(782.00 ±41.01)个,C1和C2组动合子数量均少于对照组(P＜0.05),C1组和C2组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 P％280在疟原虫种属中保守,在伯氏疟原虫的裂殖体、配子体及动合子阶段均有表达,敲除该基因可导致动合子数量减少.
疟疾、伯氏疟原虫、传播阻断疫苗、Pb280
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R382.31(医学寄生虫学)
国家自然科学基金No.81761128017
2021-03-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共8页
710-717
