10.12140/j.issn.1000-7423.2020.03.012
自然杀伤细胞在小鼠脑型疟中对CD4+T细胞亚群的免疫调节作用
目的 探讨自然杀伤(NK)细胞在小鼠脑型疟中对CD4+T细胞亚群的免疫调节作用. 方法 雌性C57BL/6小鼠随机分为健康对照组、感染组与NK消除组,每组14只.感染组与NK消除组小鼠经腹腔内注射伯氏疟原虫ANKA株(PbA)感染红细胞1×106个;NK消除组小鼠在感染前1d和感染后2d腹腔内注射NK细胞封闭抗体anti-Asialo GM-1,15 μl/只,健康对照组和感染组注射等体积的PBS.感染后3d起,采集小鼠尾静脉血,血涂片检测原虫血症,记录死亡情况.感染后3d和5d,各组剖杀小鼠3只,取脾脏,制备脾细胞悬液,流式细胞术检测脾细胞中Th1型细胞和调节性T细胞(Tregs);体外培养脾细胞,48 h后收集上清,ELISA检测γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素10 (IL-10)的水平.感染后6d,各组取3只小鼠,用伊文思蓝(EB)染液处理后,取脑,体外孵育脑组织,48 h后收集上清,酶标仪检测通过小鼠血脑屏障的EB含量. 结果 感染组感染后6d开始出现死亡,并伴有神经症状,8d全部死亡;NK消除组感染后7d开始出现死亡,12d全部死亡.感染后7d,NK消除组原虫血症为5.2％～10.5％,高于感染组的2.4％～5.0％(P＜ 0.05).感染后5d,感染组Th1型细胞的百分率和绝对计数分别为(2.65±0.06)％和(2.09～2.25)×106,高于健康对照组[(1.37±0.02)％和(0.41～0.47)×106] (P＜0.01);NK消除组分别为(1.82±0.07)％和(1.48～1.86)×106,低于感染组(P＜ 0.01或P＜0.05).感染后3d和5d,感染组Tregs的百分率分别为(1.21±0.06)％和(1.70±0.1 3)％,高于健康对照组[(0.90±0.01)％和(0.91±0.02)％](P＜0.01);感染组Tregs的绝对计数分别为(0.63～0.73)×106和(1.39～1.62)×106,高于健康对照组[(0.27～0.31)×106和(0.47～0.56)×106] (P＜ 0.01);NK消除组Tregs百分率分别为(1.86±0.07)％和(2.15±0.04)％,绝对计数分别为(0.77 ～0.90)×1 06和(1.68～2.15)× 106,均高于感染组(P＜ 0.01或P＜0.05).感染后3d和5d,感染组脾细胞培养上清中的IFN-γ分别为(790.75±84.80)和(989.58±199.59) pg/ml,TNF-α分别为(2 637.47±283.50)和(3 124.58±964.70) pg/ml,均高于健康对照组[(73.69±16.67)和(75.19±15.97) pg/ml、 (290.01±187.46)和(290.51±186.76) pg/ml] (P＜ 0.01或P＜0.05);NK消除组培养上清中的IFN-γ分别为(15.83±4.27)和(266.63±108.62) pg/ml,TNF-α分别为(165.89±71.02)和(842.77±311.94) pg/ml,均低于感染组(P＜ 0.01或P＜0.05).感染后3d, NK消除组IL-10为(3 588.20±1 436.38) pg/ml,高于感染组[(1 255.77±190.01) pg/ml] (P＜ 0.05).感染后5d,感染组IL-10为(4 991.36±1 030.89) pg/ml,高于健康对照组[(848.50±501.79) pg/ml] (P＜0.05);NK消除组为(9 317.95±1 077.89) pg/ml,高于感染组(P＜0.05).感染后6d,感染组脑组织EB含量为(4.02±0.10) μg/ml,高于健康对照组[(2.09±0.06) μg/ml](P＜0.05),NK消除组为(3.14±0.02) μg/ml,低于感染组(P＜0.05). 结论 NK细胞消除可减弱脑型疟小鼠Th1免疫应答,增强Tregs免疫应答,降低血脑屏障通透性,延长小鼠生存时间.
脑型疟、自然杀伤细胞、Th1免疫应答、调节性T细胞
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R531.33(寄生虫病)
2020-09-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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