10.12140/j.issn.1000-7423.2020.03.004
IL-18增强pcDNA3.1/SjOST48抗血吸虫感染的免疫保护性研究
目的 探讨白细胞介素18(IL-18)是否能增强DNA疫苗候选抗原pcDNA3.1/SjOST48对日本血吸虫病感染的免疫保护效果. 方法 构建pcDNA3.1/SjOST48和pcDNA3.1/IL-18真核载体,表达重组蛋白.Western blotting检测HeLa细胞内重组质粒pcDNA3.1/SjOST48和pcDNA3, 1/IL-18表达情况,ELISA检测细胞培养基中IL-18的表达情况.100只雌性BALB/c小鼠随机均分为PBS组(空白对照组)、pcDNA3.1组(空质粒组)、pcDNA3.1/IL-18组、pcDNA3.1/SjOST48组和pcDNA3.1/SjOST48+pcDNA3.1/IL-18组等5组,各组小鼠左后腿股四头肌肌内注射相应的重组质粒(30μg),共免疫3次,每次间隔14 d.末次免疫后2周,各组取5只小鼠采集血样,ELISA检测各组小鼠血清IgG抗体及其亚类(IgG1和IgG2a)水平.末次免疫后3周,各组取5只小鼠脾组织,无菌分离小鼠脾淋巴细胞,ELISA检测小鼠脾淋巴细胞上清中TNF-α、INF-γ、IL-2、IL-4、IL-6和IL-17含量及脾淋巴细胞增殖水平.末次免疫后2周,各组取15只免疫小鼠感染血吸虫尾蚴(20±1)条/鼠.感染后6周处死小鼠,无菌分离肝,计算减卵率;门静脉灌注法收集成虫,计算减虫率;另取肝组织,切片后行HE染色,显微镜下观察肝虫卵肉芽肿数量及炎症浸润情况. 结果 末次免疫后2周,ELISA结果显示,pcDNA3.1/SjOST48+p cDNA3.1/IL-18组、pcDNA3.1/SjOST48组、pcDNA3.1/IL-18组小鼠的IgG抗体水平分别为0.82±0.07、0.41±0.06、0.16±0.05,均高于pcDNA3.1组的0.12±0.03(P＜0.05);pcDNA3.1/SjOST48 +pcDNA3.1/IL-18组较pcDNA3.1/SjOST48组和pcDNA3.1/IL-18组均增高 (P＜0.05);pcDNA3.1/SjOST48 +pcDNA3.1/IL-18组和pcDNA3.1/SjOST48组的IgG2a/IgG1比值分别为4.02±0.01、2.51±0.01 (P＜ 0.05),均＞1,其他3组均＜1.末次免疫后3周,pcDNA3.1/SjOST48+pcDNA3.1/IL-18组小鼠脾淋巴细胞上清中的IL-2、TNF-α、INF-γ、IL-6和IL-17含量分别为(101.82±8.90)、 (738.02±146.22)、 (593.41±51.07)、 (685.64±171.2)、 (261.32±48.19)pg/ml,高于pcDNA3.1/SjOST48组[(55.82±9.69)、 (538.21±85.26)、 (393.41±51.07)、 (335.64±62.63)、(118.32±8.91) pg/ml] (P＜0.05)和pcDNA3.1/IL-18组[(35.16±6.43)、 (284.40±69.96) (141.91±24.48)、(198.44±38.15)、 (47.66±14.33) pg/ml] (P＜0.05),三者均高于pcDNA3.1组[(12.91±8.01)、 (74.86±6.64)(23.75±6.06)、 (82.75±10.96)、 (22.91±13.80) pg/ml] (P＜ 0.05);IL-4含量为(12.28±7.08) pg/ml,与pcDNA3.1/SjOST48组[(15.03±10.12)pg/ml]、pcDNA3.1/IL-18组[(13.59±4.42) pg/ml]、pcDNA3.1组[(16.13±10.08) pg/ml]比较差异无统计学意义(P＞0.05).pcDNA3.1/SjOST48+ pcDNA3.1/IL-18组脾淋巴细胞增殖水平为11.84±0.16,高于pcDNA3.1/SjOST48组(5.93±0.25) (P＜0.05)和pcDNA3.1/IL-18组(3.19±0.36) (P＜0.05),三者均高于pcDNA3.1组(2.08±0.16) (P＜0.05).末次免疫后2周,经日本血吸虫感染后6周,pcDNA3.1/SjOST48 +pcDNA3.1/IL-18组小鼠的平均检获成虫数为(14.33±1.08);与pcDNA3.1组比较,减虫率和减卵率分别为46.19％和44.68％,高于pcDNA3.1/SjOST48免疫组(32.18％和35.78％)和pcDNA3.1/IL-18组(13.22％和16.68％) (P＜0.05).各组小鼠肝组织切片HE染色结果显示,与其他4组比较,pcDNA3.1/SjOST48+pcDNA3.1/IL-18组小鼠肝组织虫卵结节较少,虫卵肉芽组织数量明显减少,炎症浸润不明显. 结论 IL-18能使pcDNA3.1/SjOST48免疫小鼠诱导较高水平的Th1型和Th17型免疫应答,并且增强其抗血吸虫感染的免疫保护效果.
日本血吸虫、白细胞介素18、pcDNA3.1/SjOST48、候选抗原、免疫保护性
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R383.24(医学寄生虫学)
湖南省教育厅科学研究项目;湖南省教育厅优秀青年项目
2020-09-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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