鼠细粒棘球蚴囊壁消化残片的生发细胞培养试验
目的 建立高效、经济的细粒棘球蚴生发细胞原代培养方法.方法 采用0.25％胰蛋白酶-EDTA溶液消化鼠细粒棘球蚴囊壁10～30 min,以消化后的棘球蚴囊壁残片进行组织贴壁培养原代生发细胞,以单纯组织贴壁培养法作为对照.用倒置显微镜观察生发细胞形态学动态变化,绘制生长曲线.免疫荧光试验鉴定获得的生发细胞.取残片培养的生发细胞进行小鼠腹腔返种,4个月后剖检小鼠,观察小鼠感染情况;取病变组织制石蜡切片、HE染色后,镜下观察棘球蚴囊壁生长情况.结果 0.25％胰蛋白酶-EDTA溶液消化10 min囊壁残片中的生发细胞的完整性好,胞浆丰富,2～4d后囊壁残片边缘游离出生发细胞,生发细胞培养9d后呈现集落样生长状态.0.25％胰蛋白酶-EDTA溶液消化20 min、30 min的囊壁残片中的生发细胞破碎并出现裸核.采用0.25％胰蛋白酶-EDTA溶液消化10 min的残片培养法培养生发细胞的成功率(6/10)高于单纯组织贴壁法(3/10);两种方法生长曲线均近似“S”形,残片培养法周期较短(18 d),残片培养法培养的生发细胞生长增殖水平高于单纯贴壁培养法(P＜0.01).免疫荧光结果显示,残片培养法培养18 d的生发细胞可被感染棘球蚴的人阳性血清中的抗棘球蚴抗体识别.残片培养法培养的生发细胞返种结果显示,小鼠腹腔有新生的棘球蚴囊状结构出现.HE染色结果显示,镜下可观察到发育中的棘球蚴囊壁角质层和生发层.结论 建立的0.25％胰蛋白酶-EDTA溶液消化10 min的鼠源棘球蚴囊壁残片贴壁培养法可培养出活性正常的生发细胞,并能感染小鼠.
细粒棘球蚴、生发细胞、残片、细胞培养、细胞返种
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R383.33(医学寄生虫学)
国家自然科学基金81672045
2019-03-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
571-577
