德国小蠊变应原Bla g 2单克隆抗体的制备与鉴定
目的 制备德国小蠊(Blattella germanica)变应原Bla g 2的单克隆抗体并鉴定其特异性. 方法 以纯化的0.2 mg/ml Bla g 2蛋白溶液为抗原免疫雌性BLAB/c小鼠6只,免疫4次,每次间隔1周.免疫后第5天取小鼠尾静脉血,制备小鼠血清,第6天加强免疫1次,第7天处死小鼠取脾脏,制备脾细胞悬液.测定小鼠抗血清滴度,运用杂交瘤技术将免疫脾细胞与骨髓瘤细胞融合,采用有限稀释法对阳性孔杂交瘤细胞进行克隆化.蛋白质印迹(Western blotting)检测单克隆抗体特异性,间接ELISA测定单克隆抗体效价,双抗夹心ELISA鉴定单克隆抗体的亚型. 结果 在小鼠血清稀释至1:16000时A450值仍＞0.100,判断为免疫成功.通过杂交瘤技术获得2株能稳定分泌Bla g 2单克隆抗体的杂交瘤细胞,标记为Bla g 2-1、Bla g 2-2.Western blotting结果表明,Bla g 2-1和Bla g 2-2单克隆抗体对Bla g 2蛋白均具有高度特异性.间接ELISA测得2株单克隆抗体的效价分别为Blag2-1(1∶16000)、Bla g2-2(1∶8000).双抗夹心ELISA结果表明单克隆抗体蛋白亚类均为免疫球蛋白G1 (IgG1). 结论 制备的德国小蠊变应原单克隆抗体Bla g 2能与Bla g 2蛋白发生特异性结合.
德国小蠊、Bla g 2、单克隆抗体、蛋白质印迹
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R384.9(医学寄生虫学)
国家科学自然基金No.30972714Supported by the National Natural Science Foundation of China 30972714
2017-11-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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