刚地弓形虫微线体蛋白2在不同原核表达菌中的表达与鉴定
目的 利用大肠埃希菌(Escherichia coli) BL21 (DE3)、ArcticExpress(DE3)和Shuffle等3种不同的原核表达菌表达刚地弓形虫微线体蛋白2(Toxoplasma gondii microneme protein 2,TgMIC2),并进行蛋白质印迹(Western blotting)鉴定. 方法 参照GenBank中TgMlC2基因序列设计引物,以刚地弓形虫RH株速殖子RNA为模板,RT-PCR扩增获得DNA片段,PCR产物经NdeⅠ和HindⅢ双酶切后连至原核表达载体pET-30a(+),重组质粒转化入E.coli TOP10,双酶切筛选阳性质粒,将测序正确的阳性质粒pET30a-MIC2分别转化至E.coli BL21 (DE3)、ArcticExpress (DE3)和Shuffle表达菌,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达并优化各菌株的表达条件,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测表达产物.重组蛋白经镍柱纯化后,以抗组氨酸(His)单抗为一抗,Western blotting分析其免疫反应性. 结果 TgMIC2基因的扩增产物长约2 000 bp.SDS-PAGE结果显示,TgMIC2的相对分子质量(Mr)为80 000,在不同表达菌中的表达形式及表达量存在差异;TG-MIC2在BL21 (DE3)和ArcticExpress (DE3)中均存在可溶性表达和包涵体表达,且在不同诱导条件下(15℃、16h和37℃、4h)可溶性蛋白均约占10％,表达量无明显差异;而TgMIC2在Shuffle中仪以包涵体形式表达.Western blotting分析结果显示,纯化后的可溶性TgMIC2和包涵体表达的TgMIC2重组蛋白都能被抗His的单抗识别. 结论 构建了pET30a-MIC2重组表达质粒,在3种不同的原核表达菌中成功表达TgMIC2重组蛋白.
刚地弓形虫、微线体蛋白2、原核表达、可溶性蛋白
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R382.5(医学寄生虫学)
国家自然科学基金81501770,31502057;山东省自然科学基金ZR2015YL051,ZR2015YL033,ZR2015YL032;山东省医学科学院医药卫生科技创新工程 Supported by the National Natural Science Foundation of China81501770,31502057;the Shandong Natural Science FoundationZR2015YL051,ZR2015YL033,ZR2015YL032;the Innovation Project of Shandong Academy of Medical Sciences
2017-11-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共5页
347-350,356
