致人体呼吸道感染的似棘阿米巴形态学和分子生物学鉴定
目的 鉴定某反复咳嗽患者痰液样本中形态学似棘阿米巴的寄生虫种属. 方法 分离患者痰液中原虫进行体外培养,显微镜观察原虫滋养体和包囊形态,并提取原虫DNA,采用阿米巴科18SrRNA通用引物Ami6F1和Ami9R、棘阿米巴属18S rRNA通用引物JDP1和JDP2、葛氏棘阿米巴(Acanthamoeba griffini)S-7 ATCC 18S rRNA全长序列引物AacGF和AacGR进行PCR扩增鉴定.以样本的18S rRNA基因为分子标志,与GenBank中各棘阿米巴序列进行同源性分析,筛选相关物种序列,采用最大似然法构建系统进化树,分析亲缘关系. 结果 镜下可见,患者痰样中的滋养体具有棘阿米巴特征性的棘状伪足凸起,并呈无规则的变形虫状;包囊为两层膜结构,内膜具有棘阿米巴特征性的星状突起.PCR检测结果显示,采用3组引物分别扩增出830、479和1 954 bp的条带,与预期片段大小一致.经BLAST比对后,3个扩增产物序列与棘阿米巴S-7 ATCC相似度分别达99％、99％、100％.系统进化树结果显示,样本棘阿米巴与引起角膜炎的卡氏棘阿米巴(A.castellanii)、多噬棘阿米巴(A.polyphaga)、柯氏棘阿米巴(A.cullbertsoni)和条脊棘阿米巴(A.rhysodes)同源性较高,分别为91.4％、99.6％、94.5％和91.8％. 结论 该呼吸道感染患者痰液样本中的寄生虫鉴定为葛氏棘阿米巴.
葛氏棘阿米巴、呼吸道、形态鉴定、分子鉴定
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卫生行业科研专项经费资助项目No.201202019;国家自然科学基金No.81141085 Supported by the Health Industry Special Funding for Scientific Research Projects No.201202019 and National Natural Science Foundation of China No.81141085
2016-07-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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