华支睾吸虫排泄-分泌产物对小鼠巨噬细胞一氧化氮产生和核转录因子κB活化的影响
目的 研究华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)排泄-分泌产物(ESPs)对小鼠巨噬细胞系RAW264.7-氧化氮(NO)产生与核转录因子κB (NF-κB)活化的影响. 方法 用20 μg/ml华支睾吸虫ESPs水溶性浓缩物及其有机溶剂提取物(ESPs-ex)和0.1 μg/ml明尼苏达沙门氏杆菌脂多糖(LPS-SM)分别刺激RAW264.7细胞,未刺激对照组加入等量Hank,s平衡盐缓冲液(HBSS).实验同时用0.3 mmol/L诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)抑制剂SMT作为干预.细胞培养18h后,用Griess法检测各组细胞培养上清液NO2-浓度.将pNiFty2-SEAP质粒转染至4组刺激后RAW264.7细胞,培养18h后,检测培养上清液中可溶性胚胎碱性磷酸酶(SEAP)的吸光度(A620值),倒置显微镜观察细胞内SEAP催化显色情况. 结果 经ESPs-ex和LPS-SM刺激后,细胞培养上清液中NO2-浓度分别为(14.30±1.62)和(14.10±2.17) μmol/L,均较未刺激对照组[(7.70±0.95) μmol/L]显著增加(P＜0.05);加入SMT后,两组NO2-浓度显著下降,分别为(8.97±0.81)和(4.96±1.36) μmol/L(均P＜0.05).经ESPs刺激后,上清液中NO2-浓度为(4.06±0.62) μmol/L,较未刺激对照组显著降低(P＜0.05);加入SMT后,NO2浓度为(3.99±0.87)μmol/L,无明显变化(P＞0.05).ESPs刺激后,上清液SEAP的A 620值为0.836±0.005,显著高于未刺激对照组(0.097±0.009)(P＜0.05);镜下可见细胞内出现广泛、强烈的蓝色显色反应.ESPs-ex和LPS刺激后,上清液SEAP的A620值分别为0.112±0.004和0.116±0.009,略高于未刺激对照组(P＞0.05);镜下见部分细胞内出现蓝色显色反应. 结论 华支睾吸虫ESPs能够促进RAW264.7细胞活化NF-κB,其水溶性浓缩物可抑制NO产生,ESPs-ex和LPS-SM可促进NO产生.
华支睾吸虫、排泄-分泌产物、病原相关分子模式、一氧化氮、核转录因子κB
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R383.22(医学寄生虫学)
国家自然科学基金No.31260221Supported by the National Natural Science Foundation of China No.31260221
2015-07-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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