简单异尖线虫D-天冬氨酸蛋白酶基因的克隆和表达
目的 克隆简单异尖线虫Ⅲ期幼虫(L3)的D-天冬氨酸蛋白酶基因(AsAP)全长,研究其表达蛋白的特性.方法 根据GenBank中简单异尖线虫D-天冬氨酸蛋白酶基因表达序列标签的部分信息,设计特异引物并用cDNA末端快速扩增技术得到AsAP全长序列,分析推导的蛋白序列特征,并预测其三级结构.用RT-PCR扩增简单异尖线虫L3的AsAP 基因编码序列,产物用EcoRⅠ和Sal Ⅰ双酶切,连入表达载体pET32a(+),转化大肠埃希菌(E.coli) BL21 (DE3),以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测.结果 简单异尖线虫L3的AsAP基因全长1753 bp,编码453个氨基酸,与锡兰钩虫(Ancylostoma ceylanicum)的D-天冬氨酸蛋白酶相似性达65％.该蛋白具有两个保守的催化域,1个活性中心翼环,S2和S3亚位点各1个；具有由20个氨基酸组成的N端信号肽,构成疏水性强的跨膜域.不同浓度的IPTG (0.2～～1.6 mmol/L)诱导对AsAP表达的影响较小,1.0 mmol/LIPTG诱导2h后表达量达到最高水平.结论 克隆并表达了简单异尖线虫的D-天冬氨酸蛋白酶.
简单异尖线虫、D-天冬氨酸蛋白酶、克隆、原核表达
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R941.524(药剂学)
国家自然科学基金81171595;福建省自然科学基金2010J01229
2012-12-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
294-298
