用多重PCR技术检测小管福寿螺体内广州管圆线虫幼虫
目的 建立一种多重PCR方法检测小管福寿螺体内的广州管圆线虫幼虫.方法 根据广州管圆线虫核糖体小亚基rDNA基因序列(GenBank登录号为AY295804)设计特异性引物,并与小管福寿螺16s rDNA的特异性引物组合,建立多重PCR检测方法.分别以阳性和阴性小管福寿螺DNA为模板进行多重PCR扩增,电泳鉴定并测序.用阴性小管福寿螺DNA倍比稀释200条广州管圆线虫Ⅲ期幼虫DNA模板,使之浓度分别为1 200 ng/μl、120 ng/μl、12 ng/μl、1 200 pg/μl、120 pg/μl和12 pg/μl,检测该方法的敏感性.野外采集小管福寿螺172只,肺检法检测后,进行多重PCR扩增,计算敏感性和特异性.结果 电泳和测序结果证实该多重PCR检测方法能有效扩增出目的片段,小管福寿螺和广州管圆线虫的目的片段分别为550和405 bp.该方法可检测出广州管圆线虫Ⅲ期幼虫DNA的最小浓度为120 pg/μl.肺检法和多重PCR法检测均为阳性结果的45只,两法均为阴性的100只.肺检法为阴性、多重PCR法为阳性的24只,肺检法为阳性而多重PCR法检测为阴性的3只.多重PCR的敏感性和特异性分别为93.8%(45/48)和80.6%(100/124).多重PCR法的阳性检出率为40.1%(69/172),肺检法阳性检出率为27.9%(48/172),差异具有统计学意义(χ2=14.8, P＜0.01).结论 建立了检测小管福寿螺体内广州管圆线虫的多重PCR方法.
广州管圆线虫、多重PCR、检测、小管福寿螺
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R383.19(医学寄生虫学)
"十一五"国家重大专项2008ZX10004-010;科技部自然资源平台项目2005DKA21104;国家"十五"科技攻关计划项目2003BA71ZA09-01
2011-01-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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