双抗夹心ELISA法检测弓形虫核苷三磷酸脱氢酶-Ⅱ型蛋白的研究
目的 建立双抗夹心ELISA法检测弓形虫核苷三磷酸脱氢酶-Ⅱ型(NTPase-Ⅱ)蛋白.方法 用重组弓形虫NTPase-Ⅱ(rTgNTPase-Ⅱ)蛋白免疫BALB/c小鼠,筛选高滴度、高特异性的单克隆抗体建立双抗夹心ELISA法.通过检测弓形虫速殖子全虫蛋白与rTgNTPase-Ⅱ的浓度评价该方法的敏感性.通过对疟疾(7例)、日本血吸虫病(12例)、并殖吸虫病(14例)和脑囊尾蚴病(10例)患者血清进行交叉反应试验,评价该方法的特异性.结果 获得2株稳定分泌抗rTgNTPase-Ⅱ蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为MNT1和MNT2.蛋白质印迹分析(Western blotting)显示,2株单克隆抗体均能特异性识别弓形虫rTgNTPase-Ⅱ蛋白和弓形虫速殖子全虫蛋白.以MNT1为包被抗体,MNT2为酶标抗体,建立的双抗夹心ELISA可检测出全虫蛋白的最低浓度为6 μg/ml,检测出rTgNTPase-Ⅱ的最低浓度为1.5 μg/ml.该方法的特异性为100%.结论 以抗rTgNTPase-Ⅱ蛋白单克隆抗体MNT1与MNT2为基础建立的双抗夹心ELISA法具有较高的特异性.
刚地弓形虫、单克隆抗体、核苷三磷酸脱氢酶-Ⅱ型蛋白、双抗夹心ELISA
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R531.8(寄生虫病)
浙江省科技厅面上社会发展项目2009C33035
2011-01-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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