猪囊尾蚴特异性抗原的筛选、鉴定和生物信息学分析
目的 对猪囊尾蚴的特异性抗原进行筛选、鉴定和生物信息学分析.方法 四川省雅江县呷拉乡猪带绦虫病患者,口服槟榔-南瓜子驱虫.收集、制备虫卵悬液(8万个/ml).将6头20d龄三元杂交乳猪均分实验组和窄白对照组,实验组每猪灌胃虫卵悬液1 ml.40 d后,分别制备实验组心脏血混合血清及对照组心脏血混合血清;收集、制备实验组猪囊尾蚴蛋白,进行双向电泳(2-DE)分析.将凝胶蚩白斑点转移至聚偏氟乙烯膜(PVDF膜),用实验组混合血清及对照组混合血清(均为1:10)为一抗,羊抗猪HRP-IgG(1:200)为二抗,进行蛋白质印迹(Western blot-ting)分析,比较两组杂交蛋白点的差异.确定猪囊尾蚴抗原抗体阳性杂交斑点,据此挖取双向电泳与之对应的蛋白点,用电喷雾离子阱型质谱仪(ESI-Trap MS)进行质谱鉴定.搜索美国国家生物技术信息中心(NCBI)网站信息进行生物信息学分析.结果 双向电泳凝胶共检测到207±9个蛋白质斑点,相对分子质量为Mr 14 400～94 000,等电点(pI)为3.0～10.0.筛选出7个特异性抗原,其中的4个分别为AF239799-1膜联蛋白(AF239799-1 annexin)、细胞支架肌动蛋白-2(cytoskeletal actin-2)、原肌球蛋白(tropomyosin)和肌动蛋白-1(actin-1).前1个蛋白已被鉴定为猪带绦虫特异性抗原,后3个蛋白抗原与NCBI网上登录的亚洲带绦虫成虫蛋白一致,为猪囊尾蚴特异性抗原. 结论 共获得3个猪囊尾蚴特异性抗原,即细胞支架肌动蛋白-2、原肌球蛋白和肌动蛋白-1.
猪带绦虫、囊尾蚴、抗原、双向电泳、蛋白质印迹、质谱
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R383.34(医学寄生虫学)
国家自然科学基金30660168
2009-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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