肝片吸虫组织蛋白酶L基因的克隆、表达和免疫原性分析
目的 克隆和表达肝片吸虫组织蛋白酶L基因(FhCL),分析其免疫原性.方法 根据GenBank公布的FhCL基因序列设计引物,以肝片吸虫总RNA为模板,通过RT-PCR扩增FhCL基因编码序列,PCR产物经TA克隆,通过EcoR Ⅰ、HindⅢ双酶切和测序鉴定获得重组质粒pMD18-T/FhCL,并将其亚克隆入原核表达载体pET30a(+),经PCR,以及BamH Ⅰ、HindⅢ双酶切和测序鉴定,构建原核表达质粒pET30a(+).FhCL,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)pLysS,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并获得纯化的重组蛋白FhCL,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,以及蛋白质印迹(Western blotting)分析该重组蛋白对感染肝片吸虫的山羊血清及免疫的SD大鼠血清的免疫反应性.结果 PCR和BamHⅠ、HindnⅢ双酶切均可见约1 000 bp的条带,测序结果显示重组质粒pET30a(+)-FhCL构建成功.SDS-PAGE结果表明,重组蛋白相对分子质量约为Mr42000(含6个组氨酸标签),与目的 蛋白相符,以包涵体形式表达.Western blotting分析结果显示,纯化的重组蛋白FhCL可被感染肝片吸虫的山羊血清和免疫的SD大鼠血清识别,在目的 条带Mr42000处见单一特异性条带,而阴性对照血清则无反应带.结论 克隆及表达了肝片吸虫组织蛋白酶L编码基因,重组蛋白具有良好的免疫原性.
肝片吸虫、组织蛋白酶L基因、克隆、原核表达
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R383.29(医学寄生虫学)
2009-08-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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