10.3969/j.issn.1000-7423.2005.06.012
旋毛虫肌幼虫p43cDNA的克隆及鉴定
目的克隆旋毛虫肌幼虫p43cDNA并对其表达的融合蛋白酶活性进行鉴定与分析.方法用PCR技术从旋毛虫肌幼虫cDNA文库中扩增靶基因,克隆到pMD-18T载体,转化至大肠埃希菌NovaBlue,序列测定后克隆到原核表达载体pET28a并转入表达菌DE3中.经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后提取包涵体并复性,通过降解双链λDNA测定其融合蛋白脱氧核糖核酸酶Ⅱ(DNase Ⅱ)活性.结果成功克隆到p43 cDNA序列,该cDNA序列与美国发表的存在两个核苷酸的变异,分别为第210位的C变为T,第604位的A变为G.基于3名研究者从旋毛虫T.spiralis美国分离株获得的序列相同、6名国内研究者(含本课题组)从T.spiralis中周分离株获得的序列也相同,由此可以确定这两个核苷酸的变异为T.spiralis中国分离株特异性和特征性单核苷酸多态性(SNP)标记.p43重组蛋白能够降解双链λDNA,表明其有DNase Ⅱ酶活性.结论成功克隆到p43cDNA,T.spiralis中国分离株的p43cDNA具有两个SNP标记,其表达的重组蛋白具有DNase Ⅱ酶活性.
旋毛虫、p43cDNA、克隆、表达、脱氧核糖核酸酶Ⅱ
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R383.15(医学寄生虫学)
中国科学院资助项目30328020;国际科学基金IFSB/3525-1;中-法合作项目PRA BT03-02
2006-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
432-436,440
