10.3969/j.issn.1000-7423.2004.01.012
日本血吸虫腺苷酸激酶基因的表达及其重组蛋白免疫反应性的评价
目的将亚克隆入pET32a(+)质粒的日本血吸虫腺苷酸激酶(adenylate kinase,AK)基因进行表达及蛋白纯化,并对表达产物的免疫反应性进行评价.方法将重组表达质粒pET32a(+)-AK转入宿主菌大肠埃希菌BL21,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后超声裂菌,离心,取上清进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE);将SDS-PAGE后的蛋白转移至聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上,分别用6-组氨酸(6-His)抗体、日本血吸虫尾蚴感染6 wk的兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清为一抗进行蛋白质印迹试验(Western blotting);用金属Ni螯合物亲和层析树脂(Ni-NTA)层析柱纯化目标蛋白;以纯化后的融合蛋白为包被抗原,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测正常兔血清和血吸虫感染兔血清.结果重组菌用IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE,于相对分子质量(Mr)40 000处见一特异表达带,与预期表达的融合蛋白大小相符;Western印迹分析显示该重组的融合蛋白带有预期的6-His基团,且能与尾蚴感染兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清发生特异性反应;ELISA结果显示纯化的重组AK蛋白可以特异识别血吸虫感染兔血清.结论AK基因在工程菌中以可溶性融合蛋白的形式得到表达,该重组蛋白与血吸虫感染兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清具有特异的免疫反应性.
日本血吸虫、腺苷酸激酶、基因表达、蛋白质纯化、蛋白质印迹法、酶联免疫吸附测定
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R392.11
联合国开发计划署/世界银行/世界卫生组织热带病研究和培训特别规划资助项目A00690,A00191
2004-08-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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