基于sacB负筛选标记的Targetron质粒分析系统构建
目的 构建基于sacB负筛选标记的Targetron质粒分析系统.方法 构建sacB毒蛋白诱导表达受体质粒pACYC-sacB(携带p15A复制子),分析sacB毒蛋白对大肠埃希菌的毒性.设计sacB基因打靶位点,构建脱水四环素诱导的Targetron供体质粒pSY11-sacB(携带colE1复制子和sacB405a打靶位点).双质粒共转化大肠埃希菌BL21(DE3),脱水四环素诱导Targetron表达并对sacB基因进行打靶.涂布含有5％蔗糖和0.1 mmol/L IPTG的选择培养基,筛选sacB基因失活的阳性菌落,利用菌落PCR进一步验证Ⅱ型内含子在靶位点的插入情况.结果 sacB基因表达的大肠埃希菌不能在含有5％蔗糖的平板中生长;双质粒共转化后,脱水四环素诱导Targetron表达能够插入到sacB405a靶位点;sacB基因失活后,大肠埃希菌能够在含有5％蔗糖的平板上生长,菌落PCR验证内含子插入到DNA靶位点.结论 建立了基于sacB负筛选标记的Targetron质粒分析系统,为Ⅱ型内含子功能鉴定、迁移规律分析等奠定了基础.
Targetron、sacB、Ⅱ型内含子、打靶平台
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R392
国家自然科学基金;国家自然科学基金;贵州省自然科学基金;贵州省自然科学基金;贵州医科大学培育项目
2022-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共5页
1010-1014
