类鼻疽伯克霍尔德菌AraC转录因子基因的原核表达及纯化
目的 从海南类鼻疽伯克霍尔德菌菌株BPHN001中克隆得到AraC转录因子基因,构建类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei)AraC转录因子基因原核表达质粒,对该转录因子基因进行原核表达,并对表达产物进行纯化.方法 根据AraC转录因子基因设计特异性扩增引物,将PET-28a(+)质粒和扩增得到的AraC转录因子基因产物同时用BamH I和Hind III双酶切,构建带His标签的重组质粒.经测序验证后,将重组质粒转化至大肠埃希菌BL21(DE3),采用最佳浓度IPTG进行诱导,采用SDS-PAGE鉴定重组蛋白的表达情况.通过Ni2+柱纯化目的蛋白,采用Western blot检测纯化蛋白的免疫反应性.结果 特异性引物扩增得到的产物大小约为1 000 bp,与目的基因片段1 032 bp基本一致.将扩增产物与PET-28a(+)载体连接后测序,与预期完全一致.重组载体转化BL21(DE3)后用最适IPTG浓度(0.5 mmol/L)诱导过夜(约16 h),SDS-PAGE检测表达产物分子质量在40～55 ku之间,与预期相符.表达蛋白纯化后进行Western blot,能被相应抗体识别.结论 成功克隆得到AraC转录因子基因,,构建的含AraC转录因子基因原核表达载体转化DE3后经IPTG诱导可表达出融合蛋白,经Ni2+柱纯化得到具有免疫反应原性的AraC转录因子蛋白,为AraC转录因子的功能研究奠定了基础.
类鼻疽伯克霍尔德菌、AraC转录因子、原核表达
17
R378(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
海南省自然科学基金;海南医学院科研培育基金;海南医学院大学生创新创业训练计划项目
2022-08-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共5页
761-765
