CRISPR-Cas13a辅助RAA快速检测金黄色葡萄球菌的研究
目的 建立一种金黄色葡萄球菌快速分子检测技术. 方法 根据金黄色葡萄球菌耐热核酸酶基因(nuc)保守区序列设计合成特异性引物,通过对反应条件进行优化,建立金黄色葡萄球菌重组酶介导的等温扩增技术(Recombinase aided amplification,RAA);表达纯化CRISPR-Cas13a蛋白,设计特异的crRNA (CRISPR RNA),以crRNA引导CRISPR-Cas13a蛋白对RAA产物进行检测;对优化的方法进行灵敏性和特异性评价,同时采用该方法与real-time PCR法对食品标本中的金黄色葡萄球菌进行检测,评价方法的一致性. 结果 CRISPR-Cas13a辅助RAA检测金黄色葡萄球菌的灵敏度为101 CFU/ml,高于real-time PCR,约102 CFU/ml,检测时间仅需30 min,与其他食源性致病菌无交叉反应;该方法和real-time PCR检测80份食品样品的阳性率均为8.75％,具有高度一致性(Kappa=1,P＞0.05). 结论 建立的CRISPR-Cas13a辅助RAA方法具有简便、快速、灵敏、特异等优点,为金黄色葡萄球菌的检测提供了新的技术手段.
RAA、CRISPR-Cas13a、金黄色葡萄球菌、快速分子检测
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R378.11(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
国家科技重大专项;江苏省社会发展项目
2020-05-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
253-258
