基因敲除质粒载体的构建及其在幽门螺杆菌基因敲除中的应用
目的 构建用于幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)同源重组双交换基因敲除的质粒载体,实现Hp内基因的快速敲除. 方法 以质粒pLYL03为骨架,重新排列质粒上的基因元件以减少冗余序列,用卡那霉素抗性基因(aphA)替换原质粒上的红霉素抗性基因作为抗性筛选标记,在抗性筛选标记两端构建多克隆位点用于同源重组同源臂的插入,由此构建用于Hp同源重组双交换基因敲除的质粒载体pSJHK.以质粒pSJHK为载体构建hp0169基因的同源重组双交换敲除质粒pSJHK-0169,通过电击转化方法将敲除质粒pSJHK-0169转入Hp中,用卡那霉素筛选转化子.结果 以质粒pLYL03为基础构建用于Hp同源重组双交换基因敲除的质粒载体pSJHK,大小4 371 bp.以基因hp0169作为目标基因构建同源重组双交换敲除质粒pSJHK-0169,经电击转化Hp中,获得卡那霉素抗性阳性转化子,测序确证基因敲除成功. 结论 构建的基因敲除质粒载体pSJHK实现了对Hp中目标基因的敲除,为Hp新基因功能研究和致病因子的发掘提供了有效的基因操作工具.
幽门螺杆菌、基因敲除、质粒、同源重组
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R378.99(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
国家自然科学基金;国家自然科学基金;山东省自然科学基金;山东省自然科学基金;滨州医学院科技项目;科研启动基金;科研启动基金
2017-02-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1066-1069,1073
