红斑丹毒丝菌C43065株甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因的克隆与表达
目的 克隆和表达红斑丹毒丝菌甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)基因. 方法 采用PCR从红斑丹毒丝菌C43065株基因组中扩增编码GAPDH的gapC基因片段,将其克隆至原核表达载体pET32a(+)的BamH Ⅰ和Kpn Ⅰ多克隆位点上,构建重组载体pET32a-gapC,转化大肠埃希菌BL21 (DE3),在IPTG诱导下表达N端带有Trx的重组蛋白GapC,用SDS-PAGE和Western blot检测表达产物. 结果 扩增得到的C43065株gapC基因片段大小为1 005 bp,与已报道的红斑丹毒丝菌Fujisawa株gapC基因核苷酸序列的同源性为99％.SDS-PAGE结果显示表达蛋白分子质量单位约为57 ku,与预期的大小相近.Western blot检测结果显示表达的重组蛋白GapC能与抗6个组氨酸标签鼠单克隆抗体发生特异性反应. 结论 用大肠埃希菌表达系统成功表达GapC蛋白,可用于红斑丹毒丝菌GapC生物学功能的进一步研究.
红斑丹毒丝菌、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、基因克隆、原核表达
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R378.995(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
国家自然科学基金;国家自然科学基金
2016-03-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
5-8,12
