细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因在毕赤酵母中的分泌表达及生物学功能鉴定
目的 在毕赤酵母中分泌表达细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(Echinococcus granulosus thioredoxin per-oxidase,EgTPx),并检测其抗氧化活性. 方法 从包囊中分离原头蚴,抽提总RNA,采用RT-PCR获取EgTPx的cD-NA片段并克隆至分泌型表达载体pPIC9K,构建重组表达质粒pPIC9K-EgTPx,电穿孔法转化毕赤酵母菌株GSll5,在MD平板上筛选His+克隆,采用梯度浓度G418抗性筛选高拷贝转化子,提取酵母基因组DNA,采用PCR鉴定Mut表型,阳性克隆经甲醇诱导表达EgTPx蛋白,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定,并检测其抗氧化活性. 结果 酶切和测序证实重组表达质粒pPIC9K-EgTPx构建正确,表达的目的蛋白分子质量单位约为22 ku,该蛋白可被鼠抗EgTPx多抗识别,且具有较强的抗氧化活性. 结论 在毕赤酵母表达系统中成功表达了EgTPx,该蛋白具有免疫反应性和抗氧化活性.
细粒棘球绦虫、硫氧还蛋白过氧化物酶、毕赤酵母、分泌表达、抗氧化
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R383.33(医学寄生虫学)
2014-05-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
220-224
