粉尘螨变应原Der f Mal f 6的克隆、表达及生物信息学分析
目的 克隆粉尘螨变应原Der f Mal f 6(简称Mal f 6)编码基因并构建其原核表达体系. 方法 提取粉尘螨总RNA,根据GenBank中的(AY283280.1)序列设计并合成引物,RT-PCR扩增Der f Mal f 6全长基因,克隆至pColdTF DNA载体,转化至E.coli JMI09,取阳性克隆测序；将pCold TF-Mal f 6质粒转化至BL21,IPTG诱导表达,采用SDS-PAGE验证表达产物,采用生物信息学软件预测Mal f 6的理化特性、结构和功能. 结果 RT-PCR获得全长为495 bp的Mal f 6基因.原核表达后经SDS-PAGE电泳显示其全细胞、上清及沉淀物均有蛋白表达,以上清表达量较高.生物信息学分析该蛋白由164个氨基酸组成,分子质量单位为17.7 ku,二级结构由α螺旋(4.88％)、延伸主链(37.8％)和无规则卷曲(57.32％)组成,是亲水性细胞质蛋白,具有肽酰-脯氨酰反式异构酶活性. 结论 粉尘螨变应原Mal f 6原核表达获得成功,为该变应原的进一步研究及规模生产和应用奠定了基础.
粉尘螨、变应原、原核表达、生物信息学
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R184.39(流行病学与防疫)
国家自然科学基金项目NS-FC31272369,NS-FC81001330;江苏省卫生厅招标项目Z200914;江苏省卫生职业技术教育研究立项课题J200907;江苏省"六大人才高峰"第六批资助项目
2013-07-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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