弓形虫ROP18基因原核表达载体的构建及表达
目的 采用PCR方法从刚地弓形虫RH株基因组DNA中扩增弓形虫ROP18基因,构建原核表达载体pET-ROP18,并检测融合蛋白ROP18的免疫反应原性. 方法 采用PCR技术扩增弓形虫ROP18基因,将其插入原核表达载体pET-28a中,构建原核表达质粒pET-ROP18,PCR和双酶切鉴定正确的重组质粒pET-ROP18转入大肠埃希菌BL21中,在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导下表达融合蛋白,诱导产物裂解后进行SDS-PAGE电泳,观察重组蛋白的诱导表达情况,Western blot分析重组蛋白的反应原性. 结果 以弓形虫基因组DNA为模板,PCR扩增出约1.6kb的ROP18基因片段.将其定向插入原核表达载体pET-28a,构建原核表达质粒pET-ROP18,经PCR和双酶切鉴定后测序,显示重组质粒包含ROP18蛋白基因读码框内的完整序列,能完整表达ROP18抗原蛋白.重组质粒转化菌经IPTG诱导后表达分子质量单位约63 ku的融合蛋白,以37℃1 mmol/L IPTG诱导4h表达量最大.Western blot分析重组蛋白能被鼠抗弓形虫血清识别. 结论 成功构建了原核表达载pET-ROP18,重组蛋白ROP18具有免疫反应原性.
弓形虫、ROP18、原核表达
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R382.5(医学寄生虫学)
海南省自然科学基金项目809018
2013-07-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共4页
527-529,534
