恙虫病东方体环介导恒温扩增可视化快检方法的建立
目的 建立快速检测恙虫病东方体(Orientia tsutsugamushi,Ot)的环介导恒温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),以期用于基层医院及疫区恙虫病快速筛查. 方法 以恙虫病东方体56 ku外膜蛋白基因为检测靶序列,设计2组恒温扩增引物,筛选最佳引物,优化反应条件,对多种培养物中的Ot标准株及地方株进行验证检测,以经典PCR检测为对照,评估LAMP检测方法的敏感性和特异性. 结果 建立的LAMP法可快速检测鸡胚培养物、动物脏器及病人血样中的Ot DNA,经63℃恒温扩增1h之后,即可肉眼或用浊度仪观察结果,其他5种立克次体DNA模板对照,均无特异性扩增.LAMP法测定Ot DNA的最低限为5.3×101拷贝/反应,普通PCR法为5.3×104拷贝/反应,LAMP法比普通PCR提高约3个数量级. 结论 建立的LAMP法能快速检测多种样品中的Ot 56 ku基因,方法的灵敏度和特异性高,实现了检测的可视化,适用于基层医院及疫区恙虫病筛查.
恙虫病东方体、环介导恒温扩增技术、诊断、56 ku外膜基因、灵敏度、特异性、可视化
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R376.2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
科技部传染病专项基金项目2013ZX10004103-004,2013ZX10004801-004-017,2013ZX10004218-008;军队"十二五"项目AWS11L001,AWS11L009,CWS11J258;南京军区医学创新课题10MA129,102038,11Z040
2013-07-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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