10.3969/j.issn.1673-5234.2006.05.002
霍乱肠毒素ctxA基因真核表达重组质粒的构建及表达
目的 构建霍乱肠毒素A亚单位基因(ctxA)真核表达重组质粒,并在NIH3T3细胞中进行表达.方法 用限制性核酸内切酶从重组质粒pET32a-ctxA上切下ctxA基因,导入真核表达载体pcDNA3.1(+),重组子pcDNA3.1-ctxA经限制性酶切分析、PCR鉴定和序列测定正确后,用脂质体法将重组质粒pcDNA3.1-ctxA转染NIH3T3细胞,采用免疫荧光法和Western blot对pcDNA3.1-ctxA的瞬时表达产物和稳定表达产物进行鉴定.结果重组质粒pcDNA3.1-ctxA成功转入NIH3T3细胞,利用免疫荧光技术在NIH3T3细胞膜和细胞浆中检测到了瞬时表达,用Western blot检测到转染的阳性细胞克隆稳定表达出约29 ku的蛋白.结论 成功构建霍乱肠毒素A亚单位基因真核表达重组质粒pcDNA3.1-ctxA,并在NIH3T3细胞中表达出29 ku的CTA蛋白.
霍乱肠毒素、ctxA基因、转染、体外表达
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R378.3(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
国家自然科学基金30300302
2007-01-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共4页
324-326,封三
