10.3969/j.issn.1673-5234.2003.03.005
弓形虫P24基因细胞内定位载体重组质粒的构建
目的构建编码弓形虫RH株P24基因的细胞内定位载体并进行其序列测定.方法弓形虫RH株腹腔接种小鼠,收集腹水,Trizol试剂盒抽提基因组RNA;根据基因库P24基因序列设计合成引物,采用RT-PCR法扩增编码P24的基因片段,经低熔点琼脂糖法回收并纯化;将P24基因定向克隆到细胞内定位载体pCMV/myc系列:pCMV/myc/cyto(胞质定位)、pCMV/myc/nuc(核定位)、 pCMV/myc/mito(线粒体定位)及pCMV/myc/ER(内质网定位).转化大肠杆菌TOP10感受态细胞,在氨苄青霉素阳性LB培养基平板上筛选出阳性克隆.重组子经双酶切,PCR鉴定,最后对重组子进行序列测定.结果RT-PCR方法从弓形虫RH株扩增572 bp的P24基因片段,分别构建重组质粒pCMV/myc/cyto-P24、 pCMV/myc/nuc-P24、 pCMV/myc/mito-P24和pCMV/myc/ER-P24,酶切和PCR鉴定产物大小与预期值相符合,序列测定分析进一步表明所克隆的基因为编码P24抗原的基因片段.结论成功构建编码弓形虫表面抗原P24基因真核细胞内定位载体重组质粒pCMV/myc/cyto-P24、pCMV/myc/nuc-P24、pCMV/myc/mito-P24和pCMV/myc/ER-P24.
弓形虫、致密颗粒蛋白P24、基因克隆、细胞内定位
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R382.5(医学寄生虫学)
福建省科技三项费资助项目K2001072
2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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