10.16372/j.issn.1004-6364.2024.01.010
表达鸡RSAD2蛋白的重组杆状病毒的构建与鉴定
为研究鸡S-腺苷甲硫氨酸基区域蛋白2(RSAD2)生物学功能,试验构建原核表达重组质粒pGEX-RSAD2,采用SDS-PAGE、Western blot验证RSAD2融合蛋白的表达,将融合蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体.扩增RSAD2基因克隆至pFsatBac dual真核表达载体,重组质粒经转座、蓝白斑筛选后,获得重组杆状病毒质粒pFastBac-RSAD2,重组杆粒转染至sf9昆虫细胞后收获重组杆状病毒rBac-RSAD2.用鸡传染性贫血病毒(CIAV)感染孵育RSAD2蛋白的MDCC-MSB1细胞,通过荧光定量PCR检测病毒在细胞中的增殖情况.结果显示:成功构建原核表达质粒pGEX-RSAD2,诱导表达了69 ku的RSAD2融合蛋白,制备的多克隆抗体能够与表达RSAD2蛋白的DF-1细胞特异性结合;重组杆状病毒rBac-RSAD2能够引起sf9细胞病变,且感染后的sf9细胞与制备的RSAD2多克隆抗体能够特异性结合,rBac-RSAD2表达了43 ku的RSAD2蛋白;相较对照组,孵育蛋白后的MDCC-MSB1细胞中的病毒载量降低.研究表明,成功构建了表达鸡RSAD2蛋白的重组杆状病毒rBac-RSAD2,其表达的RSAD2蛋白能够抑制CIAV增殖.
鸡、RSAD2、多克隆抗体、杆状病毒、真核表达
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S855.3(动物医学（兽医学）)
山东省自然科学基金;山东省自然科学基金;山东省重点研发计划项目
2024-01-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共8页
62-69
