10.16372/j.issn.1004-6364.2021.03.004
禽白血病病毒衣壳蛋白P27慢病毒载体的构建及其在鸡肝癌细胞中的表达
为构建禽白血病病毒(ALV)衣壳蛋白P27慢病毒表达载体,并检测其在鸡肝癌细胞LMH中的表达,试验以实验室前期构建的pcDNA3.1-p27为模板,扩增p27基因,克隆入pLVX-IRES-ZsGreen1载体,构建的重组质粒命名为pLVX-p27,与辅助质粒psPAX2和pMD2.G共转染至HEK293T细胞,包装获得表达p27基因的重组慢病毒.将慢病毒上清感染293T和LMH细胞,检测细胞中p27基因的转录水平和蛋白表达水平.结果显示:重组质粒pLVX-p27构建正确,收集的慢病毒上清滴度为9×104 TU/mL;实时荧光定量PCR、Western blot和共聚焦荧光试验结果显示P27蛋白主要定位于胞浆,p27基因的RNA和蛋白表达量在感染后96 h内随着感染时间延长逐渐升高.研究表明:表达p27基因的慢病毒包装成功,并且能感染293T及禽源LMH细胞,为进一步研究P27的生物学功能提供了工具.
ALV、P27、慢病毒载体构建、蛋白表达
43
S855.3(动物医学（兽医学）)
国家重点研发计划;国家重点研发计划;国家自然科学基金;国家自然科学基金;江苏高校优势学科建设工程项目
2021-04-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
16-21
