10.3969/j.issn.1000-6923.2020.07.043
具有LXRα活性效应物质的新型筛查方法研究
为了检测环境中潜在的LXRα效应物质.本研究以LXRα蛋白为例,利用核受体蛋白与小分子亲和结合的原理,构建了pCold-TF-LXRα重组蛋白并优化了重组蛋白的表达条件,建立了特异性捕获活性物质的方法.结果表明:诱导温度为20℃、诱导剂IPTG浓度为0.4mmol/L为重组蛋白的最佳表达条件;同时,利用LXRα 激动剂T09013174个梯度浓度(0.25,2.5,25,250μg/L)的加标回收率实验测得线性回归曲线为y=0.83604x+0.40763,R2=0.9948,证明方法具有有效性;对比pCold-TF空载体蛋白(6.42％)和重组蛋白(79.83％)对T0901317(250μg/L)的回收率,说明方法具有特异性.为了验证方法的实用性,将重组蛋白与15种典型的有机磷酸酯类化合物(OPEs)的混合标样进行"捕获"实验,证明了TPHP、BPADP、TCrP、EHDPP、TNBP、RDP、TEHP、TDCIPP具有LXRα的活性效应.最后,用酵母双杂交实验验证了这8种OPEs均为LXRα的拮抗剂.
肝X受体、重组蛋白、有机磷酸酯、酵母双杂交系统
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X171.5(环境生物学)
政府间国际科技创新合作重点专项;国家自然科学基金资助项目;国家重点研发计划
2020-08-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共9页
3156-3164
