10.3969/j.issn.1007-3639.2004.05.014
含Egr-1启动子和Smad7基因的重组腺病毒的构建
目的:构建含Egr-1启动子和Smad7 cDNA的重组复制缺陷型腺病毒并初步验证其活性,为下一步的基因治疗奠定基础.方法:以Adeno-XTM表达试剂盒为基础,应用分子克隆技术,将穿梭质粒pShuttle的CMV启动子替换为Egr-1启动子,再将Smad7 cDNA亚克隆至穿梭质粒内,然后与腺病毒DNA重组,转化大肠杆菌E.coli DH5α,PCR鉴定正确即为pAdES.脂质体法转染HEK293细胞,包装出完整腺病毒,然后大量扩增测定滴度.重组腺病毒感染成纤维细胞(3T6),经深部X线照射后通过免疫细胞化学方法检测Smad7蛋白在细胞内的表达定位.结果:经酶切、PCR及测序鉴定证实成功构建了含Egr-1启动子和Smad7的重组复制缺陷型腺病毒pAdES.病毒滴度为1.0×1011 TCID50/ml.细胞免疫化学结果显示Smad7蛋白表达定位于细胞质内.结论:利用Adeno-XTM表达试剂盒,通过分子克隆体外重组技术可以方便的构建重组腺病毒载体,并能在HEK293细胞内成功包装和扩增.通过重组腺病毒可在细胞质内表达外源性Smad7蛋白.
腺病毒、Egr-1启动子、Smad7、基因治疗
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R730.59(肿瘤学)
国家自然科学基金30170289
2004-12-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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