10.7501/j.issn.0253-2670.2013.05.022
正交设计优化地枫皮ISSR-PCR反应体系
目的 建立稳定性高、重现性好,适合地枫皮遗传差异分析的ISSR-PCR反应体系.方法 利用正交试验设计,对地枫皮ISSR-PCR反应的5个因素(Mg2+、dNTPs、引物、Taq酶和模板DNA浓度)进行优化,PCR结果用SPSS统计软件分析,在此基础上对PCR反应过程中的退火温度和循环次数进行梯度检测.结果 大部分因素的不同水平对PCR反应有显著影响,其中Taq酶影响最大；地枫皮ISSR-PCR最佳反应体系(20 μL)为:Mg2+ 1.60 mmol/L、dNTP 0.22 mmol/L、引物0.90 μmol/L、Taq酶0.50 U、模板DNA 70.00 ng;最佳退火温度和循环次数分别为51.8℃和40次；从62条引物中筛选出13条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物.结论 建立的地枫皮ISSR-PCR反应体系,经过16份地枫皮样品检验,证明该体系稳定可靠,可用于地枫皮遗传差异分析.
地枫皮、ISSR-PCR、正交设计、最佳退火温度、最佳循环次数、遗传差异
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R282.7(中药学)
中国科学院"西部之光"人才培养计划项目2009 24;广西科技创新能力与条件建设0992028-10;广西区专项基金200880;广西科技攻关项目10124008-1;广西植物研究所基本业务费项目09030
2013-05-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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