10.3760/cma.j.cn115989-20210617-00362
ILK-siRNA-AAV对大鼠青光眼滤过术后滤过通道瘢痕形成的抑制作用
目的:观察整合素连接激酶-小干扰RNA-特异性腺相关病毒(ILK-siRNA-AAV)对大鼠青光眼滤过术后滤过通道瘢痕形成的抑制作用。方法:选取SPF级8~9周龄SD大鼠48只，采用随机数表法将其分为空白对照组、ILK-siRNA-AAV组、NC-siRNA-AAV组和丝裂霉素C(MMC)组，每组12只。每只大鼠均取左眼为实验眼，右眼不做特殊处理。采用前房植入引流管法建立大鼠青光眼滤过术球结膜滤过泡模型，空白对照组、ILK-siRNA-AAV组和NC-siRNA-AAV组术后1 d滤过泡内分别注入磷酸盐缓冲液、ILK-siRNA-AAV和NC-siRNA-AAV各5 μl，MMC组术中采用含0.4 mg/ml MMC的小棉片置于结膜瓣下5 min。术前及术后1、2、3、7、14、21、28 d，采用手持式眼压计测量术眼眼压；术后1、2、3、7、14、21、28 d，采用手术显微镜观察术眼滤过泡形成情况，采用Kaplan-Meier生存分析计算滤过泡生存天数；术后28 d，采用逆转录PCR及Western blot法检测术区结膜及结膜下组织中ILK的mRNA及蛋白表达，检测ILK基因沉默效应；采用苏木精-伊红染色观察
ILK基因沉默对滤过通道组织形态的影响；采用Masson染色观察
ILK基因沉默对球结膜滤过泡术区组织胶原纤维沉积作用，计算胶原纤维染色阳性面积占整个组织视野面积的百分比。
结果:各组大鼠手术前后不同时间点眼压总体比较，差异均有统计学意义(
F分组＝76.84，
P<0.001；
F时间＝114.49，
P<0.001)，其中ILK-siRNA-AAV组术后第1、7、14和28天眼压均低于空白对照组，MMC组术后第2、3、7、14和28天眼压均低于空白对照组，ILK-siRNA-AAV组术后第7、14、21和28天眼压均低于NC-siRNA-AAV组，差异均有统计学意义(均
P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示，空白对照组、NC-siRNA-AAV组、ILK-siRNA-AAV组和MMC组滤过泡生存天数分别为(3.50±1.51)、(5.00±3.41)、(31.50±3.15)和(31.33±2.46)d，总体比较差异有统计学意义(
F＝395.83，
P<0.05)，其中ILK-siRNA-AAV组和MMC组滤过泡生存天数均多于空白对照组和NC-siRNA-AAV组，差异均有统计学意义(均
P<0.05)。各组ILK mRNA及蛋白相对表达量总体比较差异均有统计学意义(
F＝222.32、752.69，均
P<0.05)，其中ILK-siRNA-AAV组ILK mRNA及蛋白相对表达量明显低于空白对照组和NC-siRNA-AAV组，差异均有统计学意义(均
P<0.05)。苏木精-伊红染色结果显示，空白对照组和NC-siRNA-AAV组术区纤维结缔组织增生，细胞大量增生，成纤维细胞密度高，呈团块状生长；ILK-siRNA-AAV组球结膜较薄，纤维结缔组织排列疏松，少量成纤维细胞增生；MMC组结膜纤维层疏松、菲薄，形成空洞，细胞稀少。各组胶原纤维染色阳性面积百分比总体比较差异有统计学意义(
F＝741.66，
P<0.05)，其中与空白对照组比较，ILK-siRNA-AAV组和MMC组阳性染色百分比显著降低，ILK-siRNA-AAV组阳性染色百分比明显低于NC-siRNA-AAV组，差异均有统计学意义(均
P<0.05)。
结论:ILK-siRNA-AAV沉默ILK表达可抑制大鼠滤过术后滤过区组织瘢痕形成，降低眼压。
青光眼、滤过手术、整合素连接激酶、基因沉默、小干扰RNA、腺相关病毒、瘢痕形成、SD大鼠
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陕西省重点研发计划项目2020SF-265、2021SF-332;Key Research and Development Programs of Shaanxi Province2020SF-265, 2021SF-332
2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共10页
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