10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2019.10.008
小干扰RNA-TLR9对高糖下大鼠视网膜神经节细胞凋亡的抑制作用及其机制
目的 探讨Toll样受体9(TLR9)对高糖下大鼠视网膜神经节细胞(RGC)-5凋亡的影响及小干扰RNA-TLR9(si-TLR9)对凋亡的抑制作用.方法 将体外培养的RGC-5细胞分为正常对照组、高糖组、高糖+阴性对照组和高糖+si-TLR9组,分别行正常培养、高糖培养、高糖下空质粒转染和高糖下siRNA-TLR9质粒转染细胞.采用实时PCR法检测各组细胞中TLR9 mRNA表达;采用MTT法检测各组细胞存活率;采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;采用caspase-3活性检测试剂盒检测各组细胞中含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(caspase-3)活性;采用Western blot法检测TLR9及B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和磷酸化(p)-p38MAPK蛋白的表达. 结果 与高糖+阴性对照组比较,高糖+si-TLR9组细胞中TLR9 mRNA和蛋白的相对表达量明显下降,差异均有统计学意义(均P＜0.05).高糖组和高糖+阴性对照组细胞存活率分别为(78.36±5.13)％和(75.12±4.25)％,较正常对照组的(95.48±7.25)％明显降低,差异均有统计学意义(均P＜0.05);高糖+si-TLR9组细胞存活率为(86.58±5.32)％,明显高于高糖+阴性对照组的(75.12±4.25)％,差异均有统计学意义(均P＜0.05).高糖组和高糖+阴性对照组细胞凋亡率分别为(13.23± 1.22)％和(12.52±1.38)％,较正常对照组的(2.26±0.15)％明显升高,差异均有统计学意义(均P＜0.05);高糖+si-TLR9组细胞凋亡率为(7.15±0.24)％,明显低于高糖+阴性对照组的(12.52±1.38)％,差异有统计学意义(P＜0.05).与高糖+阴性对照组比较,高糖+si-TLR9组细胞中bax蛋白表达量明显下降,bcl-2蛋白相对表达量明显增加,差异均有统计学意义(均P＜0.05).高糖+si-TLR9组细胞中caspase-3活性明显低于高糖+阴性对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).与高糖+阴性对照组比较,高糖+ si-TLR9组细胞中p-p38MAPK蛋白相对表达量明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 下调TLR9表达可抑制高糖诱导的RGC-5细胞凋亡,其作用机制可能与抑制p38MAPK信号通路活化有关.
Toll样受体9、小干扰RNA、视网膜神经节细胞、高糖、凋亡、细胞培养
38
河南省科技厅创新人才项目;河南省医学科技攻关计划项目;Innovative Talents Project of Henan Science and Technology Department ;Project of Tackling Key Problems of Medical Science and Technology in Henan Province
2020-04-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
38-44
