10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2019.06.003
氯离子通道阻滞剂NPPB在TGF-β1诱导HConF细胞纤维化中的作用及其机制
目的 观察氯离子通道阻滞剂5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸(NPPB)在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的体外培养人结膜成纤维细胞(HConF)纤维化中的作用,并进一步探索其作用机制.方法 采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法筛选出TGF-β1最适作用时间和NPPB最适作用浓度,将细胞分为对照组、TGF-β1处理组和TGF-β1+NPPB组,CCK-8法检测各组HConF细胞增生值(A),采用流式细胞仪检测各组HConF细胞周期,通过细胞划痕实验和Transwell迁移实验检测各组细胞迁移情况.采用Western blot和荧光定量PCR法检测HConF细胞向肌成纤维细胞转化的标志性蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)和纤维连接蛋白(FN)的表达,同时用Western blot法检测PI3K/Akt信号通路蛋白磷酸化水平. 结果 TGF-β1可促进细胞增生,并呈时间依赖性;其中TGF-β1作用后48 h和72 h细胞A值比较,差异无统计学意义(P=0.064),选择48 h作为TGF-β1作用的最适时间.NPPB抑制HConF细胞增生作用呈浓度依赖性;与对照组比较,50 μmol/L和100μmol/L NPPB组细胞增生值明显降低,差异均有统计学意义(P=0.020、0.000),选择100 μmol/L作为NPPB的最适作用浓度.TGF-β1+NPPB组细胞A值、相对迁移面积和迁移细胞数较TGF-β1处理组下降,差异均有统计学意义(均P＜0.05);TGF-β1处理组G1期细胞比例较对照组和TGF-β1+NPPB组明显减少,S期和G2/M期细胞比例增多,差异均有统计学意义(均P＜0.05).TGF-β1处理组α-SMA、细胞外基质COL-Ⅰ和FN的蛋白及mRNA相对表达量均明显高于对照组和TGF-β1+NPPB组,差异均有统计学意义(均P＜0.05);TGF-β1处理组p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt比值明显高于对照组和TGF-β1+NPPB组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 NPPB可能通过抑制PI3K和Akt磷酸化来抑制TGF-β1诱导的HConF增生、迁移、分化及细胞外基质合成等纤维化过程.
氯离子通道、滤过泡瘢痕化、氯离子通道阻滞剂
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国家自然科学基金项目81760171National Natural Science Foundation of China 81760171
2019-07-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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