10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2013.11.009
辅酶Q10对人视网膜色素上皮细胞氧化应激损伤的保护作用
背景 有多种因素参与年龄相关性黄斑变性(AMD)的发病,其中视网膜色素上皮(RPE)细胞的氧化应激损伤与AMD的发病密切相关.实验和临床研究表明,辅酶Q10是一种强抗氧化剂,探讨其对人RPE细胞的氧化应激损伤是否有保护作用对于AMD的防治有重要的临床意义. 目的 探讨辅酶Q10对体外培养的人RPE细胞氧化应激损伤的保护作用及其作用机制. 方法 体外培养人RPE细胞,分为正常对照组(单纯培养基培养)、不同浓度(0.01、1、100 μmol/L)辅酶Q10预处理组和单纯叔丁基过氧化氢(TBHP)处理组,其中各浓度辅酶Q10预处理组以辅酶Q10预处理后暴露于TBHP,光学显微镜下观察各组RPE细胞的形态；用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测各组RPE细胞活性的变化；Annexin V-FITC/PI染色后用流式细胞仪检测细胞凋亡情况；TBARS法检测细胞的脂质过氧化水平；用DCFH-DA荧光法检测细胞内活性氧簇(ROS)水平；实时定量PCR法检测RPE细胞中促凋亡基因Fas mRNA的表达；Western blot法检测细胞中Fas蛋白的表达.结果 单纯TBHP处理组RPE细胞贴壁数量较正常对照组明显减少,而0.01、1、100 μmol/L辅酶Q10预处理组贴壁细胞数较单纯TBHP处理组增加,高浓度辅酶Q10预处理组细胞形态的改善和细胞存活的数目更接近正常对照组.与单纯TBHP处理组比较,1μmol/L、100 μmol/L辅酶Q10预处理组RPE细胞吸光度(A450)值明显增高(0.52±0.10 vs.0.25 ±0.03、0.59±0.06 vs.0.25±0.03),差异均有统计学意义(P=0.041、0.002);RPE细胞的凋亡率明显下降”(72.1±6.6)％vs.(91.7±2.3)％、(69.0±4.4)％ vs.(91.7±2.3)％”,差异均有统计学意义(P=0.032、0.004)；0.01、1、100 μmol/L辅酶Q10预处理组的细胞脂质过氧化水平依次降低,与单纯TBHP处理组比较差异均有统计学意义(P=0.047、0.030、0.015),与单纯TBHP组相比,0.01、1、100 μmol/L辅酶Q10预处理组细胞内ROS水平逐渐下降,1μmol/L、100tμmol/L辅酶Q10预处理组细胞内ROS水平明显低于单纯TBHP处理组(5.25±0.90 vs.11.39±2.30、7.91 ±0.80 vs.11.39±2.30),差异均有统计学意义(P=0.028、0.007)；与单纯TBHP处理组相比,辅酶Q10预处理组细胞中Fas mRNA表达量均有不同程度的下降,1 μmol/L、100 μmol/L辅酶Q10预处理组细胞中Fas mRNA表达量的差异均有统计学意义(P=0.049、0.008)；0.01、1、100μmol/L辅酶Q10预处理组细胞中Fas蛋白表达量均明显下降,差异均有统计学意义(P=0.001、0.000、0.000). 结论 辅酶Q10对体外培养的人RPE细胞具有保护作用,其作用在一定范围内呈浓度依赖性,这种保护作用可能与减少细胞的氧化应激损伤和抑制细胞凋亡有关.
辅酶Q10、视网膜/色素上皮细胞、氧化应激/损伤、凋亡
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教育部留学回国人员科研启动基金项目JWS1437;中央保健专项项目2117000002
2013-11-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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