10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2013.11.004
直接PCR法对感染性棘阿米巴角膜炎的诊断价值
背景 棘阿米巴角膜炎的致盲率极高,发病初期易误诊为真菌性角膜炎或病毒性角膜炎,常规的临床诊断方法费时较长,特异性差,极易错过治疗的“时间窗”.常规PCR法检测简单、特异、有效,但由于病变标本取材量少,不易提取组织DNA,限制了其临床应用. 目的 探讨非提取组织DNA的直接PCR法扩增棘阿米巴虫株18S rRNA保守序列在棘阿米巴角膜炎快速诊断中的可行性. 方法 从山东省眼科研究所暨青岛眼科医院诊治的10例棘阿米巴角膜炎患者的病变角膜中分离10株棘阿米巴虫株,经鉴定均为T4基因型虫株.用直接PCR法分别扩增棘阿米巴原虫、白念珠菌、绿脓杆菌、Ⅰ型单纯疱疹病毒以及正常人角膜上皮细胞以确定该方法的特异性.将棘阿米巴原虫稀释至不同的浓度以确定直接PCR法的敏感性.采用SPF级6周龄健康雌性BALB/c小鼠构建棘阿米巴角膜炎动物模型,于感染后第1、3、5、7、10、15天获取角膜组织,分别进行直接PCR、实时定量PCR(real-time PCR)、KOH封片镜检和原虫培养鉴定,比较各种方法的有效性和可行性.结果 直接PCR法仅能扩增棘阿米巴DNA,其他病原体DNA均未扩增出；在每个获取的棘阿米巴角膜炎样本中最少可检测到10个棘阿米巴原虫.在棘阿米巴角膜炎小鼠模型中,直接PCR法在感染后第1、3、5、7、10、15天的阳性检出率分别为80.0％ 、90.0％ 、80.0％ 、70.0％ 、70.0％和50.0％,总阳性率为73.3％,高于原虫培养法的31.7％,差异有统计学意义(P=0.005);KOH封片镜检的总阳性率为56.7％,real-time PCR法检测的总阳性率为61.7％,均略低于直接PCR法,差异均无统计学意义(P=0.056、0.172).结论 直接PCR法操作简单,在上述4种方法中对棘阿米巴原虫检测的特异性和敏感性最高,能够快速诊断棘阿米巴角膜炎,尤其对于待检标本少而无法提取DNA的患者可首选.
棘阿米巴、角膜炎、聚合酶链反应/直接法
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R772.21;R541.4;S855.9+1
国家自然科学基金81100651
2013-11-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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