10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2012.01.008
人胚胎视网膜色素上皮细胞在传代中的衰老及其机制
背景 视网膜色素上皮( RPE)细胞的衰老直接影响视网膜光感受器细胞的代谢功能,导致视网膜功能的异常和视力丧失.深入研究RPE细胞的衰老机制将有助于研究年龄相关性黄斑变性(AMD)的预防和治疗. 目的 研究人胚胎RPE细胞在传代过程中的衰老并探讨其机制. 方法 收集胎龄16 ～ 28周的人胎儿眼球6个,对人胚胎RPE细胞进行分离、培养和传代以制作RPE细胞复制性衰老模型,选择3～12代的RPE细胞用于实验.对培养和传代的RPE细胞用免疫组织化学法以人角蛋白对细胞进行鉴定.应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测各代细胞的增生活力,以RPE细胞的吸光度(A490)表示.采用流式细胞仪检测传代细胞周期和细胞线粒体跨膜电位(△ψm)的变化.结果 培养和传代的细胞呈六角形,人角蛋白检测呈棕色,第3代以后的细胞色素消失,3～6代的细胞形态正常,生长活跃,之后生长能力和增生活力下降.培养第3 ～12代RPE细胞随着传代的增加,处于G0/G1期的细胞百分比逐渐增加,差异有统计学意义(F=180.430,P=0.000),由第3代细胞的68.40％增加到第12代细胞的87.33％,细胞生长趋于停滞.各代间处于G0/G1期细胞的百分比比较,第6代细胞明显高于第3代,第9代明显高于第6代,第12代则明显高于第9代,差异均有统计学意义(t=4.002,P＜0.05；t=12.885,P＜0.01；t=16.387,P＜0.01).MTT法对RPE细胞活力的检测结果表明,随着传代次数的增多,反映RPE细胞活力的A490值逐渐下降,总体比较差异有统计学意义(F=38.770,P=0.000),第9代、第12代RPE细胞的A490值分别明显低于第6代和第9代,差异均有统计学意义(t=5.991、11.983,P＜0.01).同时,3～12代PRE细胞随着传代的增加,罗丹明123染色荧光强度逐渐降低,差异有统计学意义(F=121.680,P=0.000),第6、9、12代细胞的平均荧光强度分别低于第3、6、9代,差异均有统计学意义(t=6.918、7.620、11.207,P＜0.01). 结论 成功制作了RPE细胞随年龄而逐渐衰老的模型,提示衰老细胞线粒体膜电位降低,线粒体功能受损可能是RPE细胞衰老的机制之一.
视网膜/色素上皮、细胞衰老、细胞周期、线粒体、膜电位
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R77(眼科学)
国家自然科学基金30572010
2012-03-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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