10.3969/j.issn.1009-6213.2005.03.002
反义寡脱氧核苷酸对内皮细胞缺氧再复氧损伤组织因子表达的影响
目的研究反义寡脱氧核苷酸对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)缺氧再复氧损伤后组织因子(TF)基因转录和表达的影响.方法培养的HUVEC随机等分成为正常对照组、缺氧再复氧组、反义寡脱氧核苷酸转染组(AS/TF组)、正义寡脱氧核苷酸转染组(S/TF组)和错配寡脱氧核苷酸转染组(Sc/TF组).设计合成针对人TF的反义寡脱氧核苷酸(AS/TF),同时设计TF的正义寡脱氧核苷酸(S/TF)的错配寡脱氧核苷酸(Sc/TF)作为对照.用Super FectTransfection Reagent(SF)作载体,将AS/TF、S/TF和Sc/TF分别转染AS/TF组、S/TF组和Sc/TF组HUVEC,正常对照组和缺氧再复氧组HUVEC只加SF,不转染任何寡核苷酸.将缺氧再复氧组、AS/TF组、S/TF组和Sc/TF组HUVEC培养24h后,充入氮气,缺氧条件下培养2 h,正常条件下培养1 h,完成缺氧再复氧模型的制作.收集各组HUVEC,用发色底物法检测HUVEC表面TF的活性,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测HUVEC中的TF抗原(TF:Ag).并用膨胀裂解法分离细胞核,进行细胞核连缀反应(Run-on reaction)后,Bio-dot狭线印迹杂交检测HUVEC中的TF mRNA.结果与未经缺氧再复氧的正常对照组HUVEC相比,经过缺氧再复氧的HUVEC表面TF活性明显增强(P＜0.001),细胞裂解液中的TF:Ag也显著增多(P＜0.001),AS/TF组HUVEC的TF活性和TF:Ag的增加幅度低于缺氧再复氧组、S/TF组以及Sc/TF组(P＜0.05～0.01).体外细胞核连缀反应后,Bio-dot狭线印迹杂交显示,HUVEC缺氧再复氧后TF基因的转录增强,AS/TF组HUVEC TF mRNA的转录弱于缺氧再复氧组、S/TF组和Sc/TF组.结论HUVEC缺氧再复氧后,TF基因的转录和表达均显著增强,针对TF的反义寡脱氧核苷酸能够明显抑制HUVEC缺氧再复氧损伤后TF基因的转录和表达.提示TF反义寡脱氧核苷酸对于因TF水平升高所致的血栓性疾病可能有潜在的治疗作用.
组织因子、反义寡脱氧核苷酸、人脐静脉内皮细胞、缺氧再复氧损伤
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R364.1(病理学)
2005-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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