10.13995/j.cnki.11-1802/ts.030215
人源内皮抑素在大肠杆菌中的可溶性表达
为高效制备人源内皮抑素(human endostatin,hEDN),解决其在大肠杆菌中的可溶性表达.该研究在大肠杆菌BL21(DE3)中分别构建了hedn单基因、融合标签共表达和融合表达系统,将重组菌在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导下进行摇瓶发酵,通过SDS-PAGE分析及串联飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight/ionization time of flight,MALDI-TOF/TOF)鉴定hEDN的表达情况.结果表明,在构建的重组菌中只有含有谷胱甘肽巯基转移酶(glutathione S-transferase,GST)促溶标签的重组菌株BL21(DE3)/pGEX-6p-1-hedn能成功实现hEDN融合蛋白的可溶性表达.进一步地,通过改变诱导温度、诱导时间、诱导剂IPTG浓度及加入诱导剂IPTG时间来优化hEDN融合蛋白的表达条件,最终确定hEDN融合蛋白的最佳发酵条件为20℃,8～12 h加入0.3 mmol/L IPTG诱导36 h.通过亲和层析(PrePack GSH Purose 4 Fast Flow预装柱)初步纯化得到hEDN融合蛋白,经重组PreScission蛋白酶(PreScission protease,PPase)酶切后得到分子质量约为22 kDa的目的条带,与hEDN理论分子质量相一致.该研究为人源多肽的可溶性表达与纯化提供了研究思路,同时对微生物发酵制备功能性多肽具有一定的借鉴意义.
人源内皮抑素、可溶性表达、融合标签、谷胱甘肽巯基转移酶、多肽
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R737.25;S852.659.5;R378.21
国家重点研发计划2021YFC2100300
2022-09-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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