10.13995/j.cnki.11-1802/ts.021520
谷氨酸棒状杆菌CRISPR-Cpf1/ssDNA基因组编辑系统优化
谷氨酸棒状杆菌作为重要的微生物细胞工厂,基因组修饰已经成为调节目标代谢物的首要途径.为了提高基因定点突变的编辑效率,建立了高效省时的CRISPR-Cpf1/ssDNA基因组编辑系统.利用卡那霉素抗性作为筛选标记,构建了1株严谨的单链模式菌M-1,用于验证与统计编辑效率.首先,采用强启动子Ptuf,优化了切割效率;其次,利用重组酶RecT和合理长度与添加量的ssDNA,优化了重组效率.实验结果显示:在启动子Ptuf和RecT的双重作用下,采用滞后链(70 bp、12.5 μg)优化组合方式,使基因编辑效率提升至(80±5.7)％.由RecT介导的CRISPR-Cpf1/ssDNA基因组编辑系统可在很大程度上加快谷氨酸棒状杆菌代谢工程改造.
CRISPR-Cpf1、ssDNA、谷氨酸棒状杆菌、优化、基因组编辑
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国家重点研发计划2018YFA0900304;工业微生物优良菌种选育与发酵技术公共服务平台项目17PTGCCX00190
2019-11-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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