10.13995/j.cnki.11-1802/ts.020335
CRISPR/Cas9介导的低产尿素黄酒酵母工程菌的构建
通过代谢工程改造构建低产尿素的酿酒酵母工程菌,从根源上减少黄酒发酵液中尿素的含量及氨基甲酸乙酯(ethyl carbamate,EC)的形成.该研究利用融合PCR构建DUR3过表达组件“HOL-PGK1 p-DUR3-PGK1t-HOR”,通过CRISPR/Cas9介导的基因组编辑技术转化酿酒酵母S.cerevisiae NaDUR1,2-Δcar1,在敲除CAR1和过表达DUR1,2基因的基础上过表达DUR3基因,获得工程菌S.cerevisiae NaDUR1,2/DUR3-Δcar1.实验室黄酒发酵实验结果表明,与亲本菌株S.cerevisiae Na相比,工程菌S.cerevisiae NaDUR1,2/DUR3-Δcar1所酿黄酒发酵液中尿素含量降低了92.1％,EC含量降低了58.6％;与出发菌株S.cerevisiae NaDUR1,2-Δcar1相比,工程菌S.cerevisiae NaDUR1,2/DUR3-Δcar1所酿黄酒发酵液中尿素含量降低了43.4％,EC含量降低了16.2％.过表达DUR3的工程菌S.cerevisiae NaDUR1,2/DUR3-Δcar1具有“尿素吸收”的能力,减少EC的形成.借助CRISPR/Cas9系统,构建的酵母工程菌无外源抗性基因的引入,具有工业化应用的潜在可能性.
黄酒、酿酒酵母、尿素、氨基甲酸乙酯、CRISPR/Cas9
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江苏省自然科学基金BK20170178;国家自然科学基金31701588和31701730;江苏高校优势学科建设工程资助项目;高等学校学科创新引智计划111计划资助项目111-2-06;江苏省现代工业发酵协同创新中心资助项目
2019-08-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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