10.13995/j.cnki.11-1802/ts.016821
Clostridium clariflavum GH10木聚糖酶的克隆表达、酶学性质及位点功能分析
首次将来源于Clostridium clariflavum的木聚糖酶基因Clocl-2441中的糖苷水解酶家族10(glycosyl hydrolase families,GH)结构域基因连接到pET28a(+)载体上,在E.coli BL21(DE3)成功异源表达.经镍柱和脱盐分离纯化达到电泳纯,并对其酶学性质进行解析.结果表明,重组木聚糖酶rXyn2441 GH 10最适温度和pH分别为70℃和7.0,属于中性嗜热木聚糖酶.rXyn2441 GH 10在65℃以下和pH 4.0 ～9.0范围比较稳定,金属离子中5 mmol/L的Mg2可以提高79.2％的酶活.以榉木木聚糖为底物重组酶的动力学参数,Vmax为1 691.5μmol/(mg·min),Km值为2.5 mg/mL,kcat为1 236.4/s,kcat/Km为494.6 mL/(mg·s).定点饱和突变表明209位点的组氨酸对酶活有重要的作用.
Clostridium clariflavum、Glycosyl hydrolase families 10木聚糖酶、大肠杆菌、定点饱和突变
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111引智计划111-2-06;江苏省现代工业发酵协同创新中心资助
2018-08-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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