耐热纤维素酶在大肠杆菌中的高效表达及酶学特性分析
将来源于热纤梭菌(Clostridium thermocellum ATCC 27405)的编码内切β-1,4-葡聚糖酶的结构基因(celD)分别插入到pHsh和pET两个表达系统,分别得到质粒pHsh-celD和pET-20b-celD.将重组质粒转化入大肠杆菌Escherichia coli BL21-CodonPlus(DE3)-RIL中表达,在pET系统表达时形成包涵体,采用热激表达系统pHsh在大肠杆菌表达时实现了纤维素酶的可溶性表达.SDS-PAGE结果显示,该重组酶的分子质量为66kD,与理论值相符.纯化的纤维素酶的最适反应pH为5.4,在特性不同的pH条件下60℃保温30 min,重组纤维素酶在5.4～7.8的pH范围内比较稳定,在75℃下酶的半衰期约为1h,Ca2+可以增强酶活,而EDTA则会抑制酶的活性.基于热激载体pHsh的重组表达系统具有诱导表达简便、诱导方式廉价的优点,且重组酶热稳定性非常好,这对该酶的大规模发酵应用具有重要意义.
纤维素酶、表达、包涵体、热激载体
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2014-06-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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