10.7506/spkx1002-6630-201406018
肠炎沙门氏菌EMA-PCR检测方法的建立
将荧光染料叠氮溴化乙锭(ethidium monoazide,EMA)与聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测技术相结合,用于肠炎沙门氏菌活菌的检测.实验参数优化结果表明,当EMA终质量浓度50μg/mL、曝光时间10 min时,可以抑制约107 CFU/mL肠炎沙门氏菌死菌DNA的扩增;活菌灵敏度检测结果显示,EMA-PCR方法检测限与单一PCR方法一样均为27.5 CFU/mL,说明EMA处理既不会影响活菌DNA的扩增也不会影响PCR方法的灵敏度.利用EMA-PCR方法检测死活混合菌液时发现,添加EMA的实验组DNA条带亮度会随着活菌比例的降低而变暗,且当样品中全是死菌时,没有目标条带出现;而不添加EMA的对照组DNA条带亮度没有变化,当样品中全是死菌时,目标条带依然清晰可见.说明添加EMA可以达到区分死活菌的目的,EMA-PCR方法只检测样品中的活菌,避免了死菌DNA造成假阳性的可能性.
叠氮溴乙锭、聚合酶链式反应、肠炎沙门氏菌
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TS251.7(食品工业)
“十二五”国家科技支撑计划项目2012BAD28B03;国家自然科学基金青年科学基金项目31000799;国家现代农业产业技术体系专项CARS-42
2014-07-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共4页
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