10.13386/j.issn1002-0306.2022050015
豇豆血红蛋白LbⅡ在大肠杆菌中的重组表达条件优化、纯化与鉴定
豇豆根瘤中含有大量豆血红蛋白.该蛋白是良好的天然色素,可用于人造肉的着色,本文将携带豇豆血红蛋白LbⅡ基因的质粒pET-15b转化进入大肠杆菌BL21中表达,并对表达条件进行优化.通过查找NCBI数据库得到一条全长456 bp的豇豆血红蛋白LbⅡ的序列,以pET-15b作为表达载体,大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-R-IL作为重组工程菌进行表达,成功表达出豇豆血红蛋白LbⅡ,并使用镍柱层析对蛋白进行初步纯化,同时添加抗坏血酸为抗氧化剂.以IPTG浓度、温度、时间为自变量,LbⅡ表达量为因变量进行单因素实验.结果表明,在IPTG终浓度为1.0 mmol/L、诱导温度为25℃,时间为14 h时,重组豆血红蛋白LbⅡ的表达量最高,经SDS-PAGE凝胶电泳和可见光光谱分析法鉴定为目的蛋白LbⅡ.经响应面试验优化后,表达量可以达到7.30μg/mL.本研究为后续使用工程菌发酵生产豆血红蛋白奠定了基础.
豇豆、血红蛋白、响应面优化、重组表达
44
TS201.2(食品工业)
山东省重点研发计划2020CXGC010604
2023-02-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共8页
163-170
