10.13386/j.issn1002-0306.2017.14.020
亚硝酸还原酶基因克隆、表达与纯化
该研究通过聚合酶链反应(PCR)方法从木糖氧化产碱菌(Achromobacter xylosoxidans DL-1)基因组DNA中成功克隆含铜亚硝酸还原酶基因.PCR测序表明该基因全长1083个核苷酸,编码360个氨基酸,预测其理论分子质量约38.924 kDa,等电点(pI)4.83,命名为CuNiR(Genbank登录号KX674378).结构域分析该蛋白编码区包含信号肽,1个铜离子结合位点,1个氧化还原酶催化域.将CuNiR基因构建到pET22b载体,并转化至大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)BL21(DE3)中诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测显示目的蛋白可溶表达.利用镍柱亲和层析纯化重组蛋白,酶活检测显示比活力为123.82 U/mg,为后期含铜亚硝酸还原酶(CuNiR)的生化性质表征奠定理论基础.
木糖氧化产碱菌DL-1、含铜亚硝酸还原酶(CuNiR)、克隆、表达、纯化
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TS201.2(食品工业)
国家自然科学基金项目31500039
2017-11-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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